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通过活性酯与碳二亚胺联合法或混合酸酐法将5-甲基水杨酸与牛血清白蛋白偶联制得偶联比分别为14.6和3.4的免疫原(简称1和2).用1和2分别免疫雄性新西兰大白兔得到两种多克隆抗体(简称3和4).用间接竞争ELISA测得3和4的抗体效价分别为1:256000与1∶128 000.用3建立了测定5-甲基水杨酸的间接竞争ELISA法.该方法的IC50为149.04 ng·mL-1,最低检测限为4.19 ng·mL-1;3与苯酚、对甲酚和邻氨基四甲基苯酚的交叉反应率均<0.1%.