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目的
建立骨骼肌卫星细胞(SMSC)的体外分离、原代培养、鉴定方法,观察细胞的成肌分化特点。
方法采用组织块法结合差速贴壁法获得SMSC。采用免疫荧光和流式细胞仪以Pax7为标志物鉴定分离获得的卫星细胞纯度,用分化培养基诱导SMSC的体外分化,实时定量PCR法检测分化标志基因成肌决定因子(MyoD)和生肌素的mRNA相对表达量。
结果组织块法培养约1周,可见细胞从组织块边缘爬出。经差速贴壁法纯化后,流式细胞仪检测所获得的原代SMSC纯度可达97.6%。细胞体外诱导分化后,MyoD和生肌素基因呈时序性表达。
结论组织块法可成功获得高纯度的SMSC,在体外具有良好的分化能力。