【摘 要】
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目的 研究新型联合基质--BMSCs-去上皮细胞羊膜(denuded human anmiotic membrane,DHAM)桥接大鼠脊髓横断性损伤断端,促进轴突再生及提高后肢运动功能的作用.方法 取健康产妇
【机 构】
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哈尔滨医科大学第一临床医学院,哈尔滨,150001;东北农业大学生命科学学院
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目的 研究新型联合基质--BMSCs-去上皮细胞羊膜(denuded human anmiotic membrane,DHAM)桥接大鼠脊髓横断性损伤断端,促进轴突再生及提高后肢运动功能的作用.方法 取健康产妇正常剖宫产术后自愿捐献的羊膜,经联合消化法彻底去除表面上皮细胞制备DHAM,并行HE染色观察.健康4周龄雌性Wistar大鼠4只,取骨髓行BMSCs分离、培养,取第4代细胞以PKH26标记后,以1×105个/cm2密度接种于DHAM上制备联合基质(BMSCs-DHAM).倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察BMSCs生长状态.另取8周龄雌性Wistar大鼠40只,体重200～220 g,制备T9脊髓横断性损伤模型,随机分为4组,每组10只.A、C组分别用BMSCs-DHAM和单纯DHAM包裹脊髓的2个断端,B、D组分别于脊髓损伤中心注射10μL细胞浓度为1×104个/μL的BMSCs和等量生理盐水.术后12周采用BBB运动评分检测大鼠后肢运动功能恢复情况,行皮层运动诱发电位(motion evoked potential,MEP)测定;生物素化葡聚糖胺(biopinylated dextan amine,BDA)顺行示踪检测及神经丝蛋白200(neurofilament protein 200,NF-200)免疫荧光染色观察.结果 HE染色显示联合消化法成功制备DHAM.镜下观察到BMSCs在DHAM上生长状态良好.术后12周,A组BBB评分达(12.50±1.26)分,明显高于其余各组(P<0.05).MEP测定显示,A组潜伏期(3.52±2.45)ms及波幅(480.68±18.41)μV,恢复效果优于其余各组(P<0.05).BDA顺行示踪观察示,A组损伤平面以下BDA通过损伤部位的轴突再生率为54.12%±3.30%,均高于其余各组(P<0.05);且A组NF-200免疫荧光染色亦可见大量再生轴突通过损伤部位.结论 新型联合基质BMSCs-DHAM一定程度上提高了脊髓横断性损伤大鼠的后肢运动功能,是一种具有广泛应用前景的基质材料.
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