【摘 要】
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目的 分析铜绿假单胞菌在耐药性变化时菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)毒力相关蛋白的表达差异,结合患者的临床资料,探讨耐药性变化与细菌毒力变化的相关性.方法 筛选源于同一患者呼
【机 构】
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重庆医科大学第一附属医院感染科,广州医学院呼吸疾病国家重点实验室
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目的 分析铜绿假单胞菌在耐药性变化时菌株Ⅲ型分泌系统(T3SS)毒力相关蛋白的表达差异,结合患者的临床资料,探讨耐药性变化与细菌毒力变化的相关性.方法 筛选源于同一患者呼吸道、多次分离、药敏谱发生动态改变的铜绿假单胞菌,用肠杆菌基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)方法确定菌株的同源性,以同一克隆的菌株体系为研究对象,Kirby-Bauer纸片法检测菌株对药物的敏感性,PCR方法检测T3SS系统和菌株的毒力基因型,双向蛋白电泳比较菌株的全菌蛋白表达谱,质谱分析差异蛋白点,并在蛋白质数据库进行检索.收集患者临床信息,了解临床特征、细菌耐药性、毒力相关蛋白三者间的关系.结果 筛选出1例慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并肺炎的患者符合入选条件,其1年内3次呼吸道分离出铜绿假单胞菌,药敏谱依次为:敏感→多重耐药(MDR)→泛耐药(PDR).3株菌株毒力基因属exo U+/exo S-型,经ERIC-PCR证实为同一克隆.双向凝胶电泳显示3株菌有21个差异表达蛋白.质谱分析发现其中11个蛋白功能明确(9个与细菌基础代谢有关).仅毒力相关蛋白二硫化物氧化还原酶A(DsbA)在PDR株时表达明显上调,在敏感株表达最低.临床信息显示该患者在分离出PDR时,肺部感染最重,并于1个月后死亡.结论 在长期定植、感染过程中,生存环境的变化可能导致铜绿假单胞菌的耐药表型发生变化,同时菌株毒力加强,共同导致感染难于控制.DsbA在铜绿假单胞菌毒力变化中可能发挥了重要的作用.
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