【摘 要】
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目的 构建含人酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)基因的重组慢病毒质粒,建立稳定过表达TrkB的肾癌细胞株786-O并观察TrkB过表达后细胞增殖能力变化.方法 扩
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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目的 构建含人酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)基因的重组慢病毒质粒,建立稳定过表达TrkB的肾癌细胞株786-O并观察TrkB过表达后细胞增殖能力变化.方法 扩增TrkB编码序列(coding sequence,CDS),并与pLV-EGFP(2A)puro载体连接.将连接产物导入HEK293V细胞包装成病毒颗粒并感染肾癌细胞株786-O.Western blotting 检测TrkB蛋白表达.MTS法和克隆形成实验检测786-O增殖能力变化.结果 重组慢病毒质粒pLV-EGFP(2A)puro-hTrkB构建成功,感染靶细胞后获得稳定过表达TrkB的肾癌细胞株786-O.重组质粒组TrkB蛋白表达显著升高.MTS实验中,重组质粒组490 nm吸光值明显降低(P＜0.05);克隆形成实验中,重组质粒组克隆形成数明显低于空载体组(P＜0.05).结论 稳定过表达TrkB可能抑制肾癌细胞786-O细胞增殖.
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