【摘 要】
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目的分析人和猪软骨细胞 aggrecan球间区域( interglobular domain, IGD)蛋白酶水解位点的同源性,在分子水平探讨猪软骨细胞作为组织工程化软骨研究模型的意义.方法通过 RT-P
【机 构】
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上海市第二医科大学附属第九人民医院整复外科
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(973计划);
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目的分析人和猪软骨细胞 aggrecan球间区域( interglobular domain, IGD)蛋白酶水解位点的同源性,在分子水平探讨猪软骨细胞作为组织工程化软骨研究模型的意义.方法通过 RT-PCR扩增人和猪软骨细胞 aggrecan IGD片段,将纯化的 RT-PCR产物克隆入 T 载体,通过测序、软件分析及 Northern杂交,比较二者基因和氨基酸序列的同源性.结果人和猪 aggrecan IGD cDNA有 84%的同源性.经 PSI-BLAST(Position Specific Iterated BLAST)分析,相关的氨基酸序列的同源性也达到 84%,表明其在进化过程中高度保守. Northern杂交可见,人和猪的 aggrecan IGD探针对猪总 RNA均有明显的分子量大小相同的放射自显影条带. 结论猪软骨细胞可以作为组织工程化软骨研究的模型,对软骨细胞老化和体内构建软骨的降解等过程中蛋白酶参与的 aggrecan水解反应进行深入的探讨,为完善组织工程化软骨的构建提供分子水平的依据.
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