【摘 要】
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【目的】研究中国仓鼠卵巢上皮细胞(Chinese Hamster Ovary Cell,CHO cell)是否表达蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)μ亚型。【方法】参照GeneBank数据库PKCμ亚型的cDNA序
【机 构】
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武警医学院药理学教研室,武警广东第二支队,武警总医院眼眶病研究所
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【目的】研究中国仓鼠卵巢上皮细胞(Chinese Hamster Ovary Cell,CHO cell)是否表达蛋白激酶C(Protein Kinase C,PKC)μ亚型。【方法】参照GeneBank数据库PKCμ亚型的cDNA序列;通过EMBL-EBI数据库的CLUSTALW,选取种属间同源性最高的序列;利用GENERUNNER软件设计PKCμ亚型的特异引物;RT-PCR扩增CHO细胞PKCμ亚型的cDNA序列;利用AT克隆技术将PKCμ连接到pGEM-T载体上,经蓝白斑筛选,酶切鉴定后测序;Western blotting方法检测CHO细胞中PKCμ亚型。【结果】运用RT-PCR和Western blot-ting技术证实CHO细胞表达PKCμ亚型,并经测序证实。【结论】CHO细胞中发现PKCμ亚型的存在,为深入研究PKCμ亚型的结构、功能及与细胞内信号转导通路的关系奠定基础。
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