人Ⅰ型胶原基因脂质体转染牛耳细胞克隆筛选方法

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构建连接有人Ⅰ型胶原基因的质粒(PGC1-collagen),利用脂质体介导的方法转染荷斯坦奶牛耳成纤维细胞,优化一系列转染条件以提高转染效率,再利用G418和GFP荧光的表达来筛选稳定转染的细胞,最后以未转染的成纤维细胞作为阴性对照组,PGC1-collagen作为阳性对照组对转染的细胞进行PCR验证。结果显示:在6孔培养板中细胞融合度达到50%~60%左右介导1~3μg重组质粒转染24 h,转染效率可达25%~30%,筛选单克隆细胞在荧光显微镜观察检测到绿色荧光蛋白的表达。在使用800 U的G418筛
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