【摘 要】
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目的:探讨miR-152通过靶向成纤维细胞生长因子2(FGF2)对肺癌A549细胞系的增殖和侵袭的作用机制.方法:通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549细胞中miR-152和FGF2的表达情况;采用转染技术,分别特异性表达肺癌A549细胞系中miR-152和FGF2基因的表达.将肺癌A549细胞系分为6组:miRNA空转组(miR-NC组)、miR-152过表达组(miR-152 mimics组)、miR-152抑制组(miR-152 inhibitor组)、FGF
【机 构】
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郑州人民医院急诊科,郑州450000;河南省胸科医院胸外科,郑州450000
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目的:探讨miR-152通过靶向成纤维细胞生长因子2(FGF2)对肺癌A549细胞系的增殖和侵袭的作用机制.方法:通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测正常上皮细胞BEAS-2B和肺癌A549细胞中miR-152和FGF2的表达情况;采用转染技术,分别特异性表达肺癌A549细胞系中miR-152和FGF2基因的表达.将肺癌A549细胞系分为6组:miRNA空转组(miR-NC组)、miR-152过表达组(miR-152 mimics组)、miR-152抑制组(miR-152 inhibitor组)、FGF2过表达空转组(pcDNA3.1-NC组)、FGF2过表达组(pcDNA3.1-FGF2组)和miR-152过表达+FGF2过表达组(miR-152+pcDNA3.1-FGF2组).通过qPCR检测A549细胞系中miR-152和FGF2的表达水平;细胞克隆和Transwell小室实验分别检测A549细胞系的增殖和侵袭能力;采用双荧光报告基因法验证miR-152与FGF2结合情况;Western印迹法检测A549细胞系中FGF2、自噬标志蛋白微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)Ⅱ/Ⅰ、beclin1和p62的表达量.结果:qPCR结果显示,与正常上皮细胞BEAS-2B比较,肺癌A549细胞中miR-152的表达量显著降低(P<0.01),而FGF2的表达量显著增加(P<0.01).TargetScan生物信息学软件预测显示miR-152与FGF2的3\'UTR结合,双荧光报告基因检测结果显示,miR-152与FGF2直接结合.细胞克隆和Transwell小室实验结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimics组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著减低(P<0.05),miR-152 inhibitor组的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05).与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组中的A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05).与miR-152 mimics组比较,miR-152+pcDNA3.1-FGF2组中A549细胞系的增殖和侵袭能力显著增加(P<0.05).Western印迹结果显示,与miR-NC组比较,miR-152 mimic组FGF2和p62蛋白表达显著降低(P<0.05),但LC3BⅡ/Ⅰ和beclin1的表达量显著增加(P<0.05),而miR-152 inhibitor组结果与之相反.与pcDNA3.1-NC组比较,pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加(P<0.05),而LC3BⅡ/Ⅰ和beclin1的表达量显著降低(P<0.05).与miR-152 mimics组比较,miR-152+pcDNA3.1-FGF2组FGF2和p62蛋白表达显著增加(P<0.05),LC3BⅡ/Ⅰ和beclin1蛋白表达量显著降低(P<0.05).结论:miR-152靶向FGF2抑制肺癌A549细胞系自噬,从而降低增殖侵袭能力,可成为肺癌临床治疗的新靶点.
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