【摘 要】
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目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(P_(CEA))联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达
【机 构】
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西安交通大学医学院:第一附属医院普外科,西安交通大学医学院:第二附属医院普外科
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目的:构建5个拷贝的缺氧反应元件(5HRE)增强子和癌胚抗原启动子(P_(CEA))联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因(TSST-1)与CD80分子跨膜序列(CD80TM)融合基因的逆转录病毒表达载体.方法:设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆P_(CEA),从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因.利用重叠PCR法从pCMV-SPOR-T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段.选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体,选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ,联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子(P_(CMV IE)).将上述基因片段与去除了PCMV IE的pLEGFP-N1重组,构建携带5HRE、PCEA、TEST-1、linker-CD80TM基因的逆转录病毒表达载体.结果:成功克隆PCEA和TSST-1基因.构建了融合中性linker的CD80TM,测序与预期相符.将上述片段重组到载体pLEGFP-N1上,酶切鉴定和DNA序列分析无误.结论:成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-P_(CEA)-TEST-1-linker-CD80TM,为下一步的体外实验奠定了基础.
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