【摘 要】
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目的构建幽门螺杆菌粘附素(hpa A)和霍乱毒素B亚单位(ctx B)融合基因的原核表达载体,诱导表达并进行纯化.方法用PCR扩增hpa A和ctx B两个目的基因片段,克隆至同一pQE-30表达
【机 构】
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重庆医科大学微生物学教研室,重庆,400016
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目的构建幽门螺杆菌粘附素(hpa A)和霍乱毒素B亚单位(ctx B)融合基因的原核表达载体,诱导表达并进行纯化.方法用PCR扩增hpa A和ctx B两个目的基因片段,克隆至同一pQE-30表达载体中,构建含双基因的表达质粒pQE-hct,转化E.coli DH5α,经IPTG诱导表达融合蛋白HCT;经Western blot分析其免疫原性,采用镍离子柱进行纯化.结果经测序HCT融合基因片段由1161 bp组成,为编码387个氨基酸残基的多肽.经SDS-PAGE分析相对分子质量约为40000.可溶性蛋白占菌体总蛋白的25%以上,经亲和层析后可获得纯度为92%以上的重组融合蛋白.经Western blot检测可被Hp全菌抗血清和CT抗血清识别.结论已成功构建融合蛋白HCT的原核表达载体并能高效表达,为研制Hp口服疫苗提供依据.
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