【摘 要】
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为了建立一种特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低的羊口疮病毒检测方法,试验根据GenBank中羊口疮病毒(登录号为AY386264)ORFVgORF102基因DNA序列,应用Beacon Designer7.
【基金项目】
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云南省科技厅农业科技创新工程项目(2008LA019)
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为了建立一种特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低的羊口疮病毒检测方法,试验根据GenBank中羊口疮病毒(登录号为AY386264)ORFVgORF102基因DNA序列,应用Beacon Designer7.0软件设计、合成了1对SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR引物。结果表明:经反应条件优化后,建立了羊口疮病毒SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR,最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳模板浓度为3.61～36.1 ng/μL或2.385×107～2.385×108copies/μL;该方法组内及组间变异系数均小于2%,检测灵敏度可达到3.61 pg/μL或2.385×104copies/μL,上机检测时间不超过1 h;运用该方法对2份临床样品进行定量检测,样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.4×109copies/μL和8.7×108copies/μL。说明试验所建立的羊口疮病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR具有特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低等优点,适合于羊口疮病毒临床样品的检测。
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