杜仲EuGT2基因的原核表达及蛋白纯化

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本研究以克隆所得杜仲(Eucommia ulmoides) EuGT2基因为基础,利用基因重组技术构建原核表达载体pMCSG19-EuG T2.重组载体转化到E.coli Rosetta (DE3)中,用0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)在37℃下诱导6h.使用镍-亚氨基二乙酸(Ni-IDA)亲和层析柱进行纯化,并用15%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳进行检测.研究结果表明,杜仲EuGT2基因在E.coli Rosetta (DE3)中得到成功表达,重组蛋白表达形式为部分包涵体、部分可溶性蛋白.经SDS-PAGE凝胶电泳检测,在相对分子质量约56kD处有1条特异性蛋白条带,经质谱鉴定该特异性蛋白条带确为杜仲EuGT2蛋白.以上研究结果为后续研究杜仲糖基转移酶的功能提供了科学依据.
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