【摘 要】
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目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)保存大鼠心脏死亡后捐献(DCD)供肝移植后对胆管上皮细胞(BEC)的作用。方法体外培养、鉴定和扩增SD大鼠的第三代BMMSCs，以及通过Ad/HO-1修饰的BMMSCs(Ad/HO-1/BMMSCs)，建立体外稳定的NMP系统装置；采用220只6～8周龄体重200.0～220.0 g雄性SD受体大鼠
【机 构】
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天津医科大学一中心临床学院，300192,天津医科大学一中心临床学院，300192,天津医科大学一中心临床学院，300192,天津医科大学一中心临床学院，300192,天津市第一中心医院器官移植中心
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目的研究血红素加氧酶-1(HO-1)修饰的骨髓间充质干细胞(BMMSCs)联合常温机械灌注(NMP)保存大鼠心脏死亡后捐献(DCD)供肝移植后对胆管上皮细胞(BEC)的作用。
方法体外培养、鉴定和扩增SD大鼠的第三代BMMSCs，以及通过Ad/HO-1修饰的BMMSCs(Ad/HO-1/BMMSCs)，建立体外稳定的NMP系统装置；采用220只6～8周龄体重200.0～220.0 g雄性SD受体大鼠构建心脏死亡后热缺血30分钟DCD移植肝模型；将220只SD受体大鼠按照随机数表法随机分成假手术组(S组)、冷保存组(SCS组)、单纯NMP组(NMP组)、BMMSCs联合NMP组(BP组)和Ad/HO-1修饰的BMMSCs联合NMP组(HBP组)，每组44只，其中NMP组、BP组和HBP组均进行4 h体外灌注。各组分别于移植术后0d、1d、7d和14d取材并检测相关指标，观察受体生存时间、肝功能以及胆管病理学改变。通过蛋白质免疫印迹法以及免疫组化染色检测BEC中细胞角蛋白19 (CK19)表达，TUNEL染色测定凋亡的BEC，免疫组化法检测凋亡相关蛋白caspase-3的表达。
结果HBP组大鼠术后生存时间较其他各组明显延长[SCS组(5.6±0.8)d比NMP组(18.4±2.0)d、比BP组(20.5±1.5)d、比HBP组(82.5±3.2)d]，差异均具有统计学意义(均P<0.05)；与其他各组相比，BP组和HBP组在肝功能、胆管病理学等方面得到显著改善，BEC中CK19蛋白表达显著增加[术后14d：S组(0.81±0.02)比SCS组(0.35±0.03)、比NMP组(0.47±0.02)、比BP组(0.63±0.02)、比HBP组(0.77±0.01)]，差异均具有统计学意义(均P<0.05)；BEC的凋亡数量以及凋亡相关蛋白caspase-3的表达明显降低[术后14d：S组(10.0±1.2)%比SCS组(57.3±5.5)%、比NMP组(40.1±4.6)%、比BP组(32.0±2.2)%、比HBP组(13.7±3.1)]，差异均具有统计学意义(均P<0.05)；而HBP组较BP组相比保护作用更明显，差异具有统计学意义(P<0.05)。
结论Ad/HO-1修饰BMMSCs较单用BMMSCs联合NMP体外保存大鼠DCD供肝可以更好地保护移植肝中BEC功能，提高移植术后生存率。
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