【摘 要】
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目的 本研究主要探讨micro RNA-291b-3p(miRNA-291b-3p)在糖尿病小鼠中的异常表达情况,并进一步探讨其在原代肝细胞中对胰岛素信号通路的影响.方法 首先,通过实时荧光PCR的方法,检测正常C57小鼠及db/cb小鼠中micro RNA-291b-3p的表达水平.其次,在体外构建高表达和低表达micro RNA-291b-3p的腺病毒载体,并将其分别转染进入小鼠原代肝细胞中.
【机 构】
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北京大学第五临床医学院卫生部北京医院,北京市100730;卫生部北京老年医学研究所卫生部北京老年医学重点实验室,北京市100730
【出 处】
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第十二次全国动脉硬化性疾病学术会议
论文部分内容阅读
目的 本研究主要探讨micro RNA-291b-3p(miRNA-291b-3p)在糖尿病小鼠中的异常表达情况,并进一步探讨其在原代肝细胞中对胰岛素信号通路的影响.方法 首先,通过实时荧光PCR的方法,检测正常C57小鼠及db/cb小鼠中micro RNA-291b-3p的表达水平.其次,在体外构建高表达和低表达micro RNA-291b-3p的腺病毒载体,并将其分别转染进入小鼠原代肝细胞中.然后,荧光显微镜下检测腺病毒载体的转染效率并通过实时荧光定量PCR方法检测腺病毒载体高表达和低表达micro RNA-291b-3p的情况.当原代肝细胞中micro RNA-291b-3p高表达和低表达的模型建立后,进一步检测胰岛素信号通路受损情况并对其具体作用机制进行深入探讨.结果 与正常C57小鼠相比,db/db小鼠中micro RNA-291b-3p的表达水平明显上升.荧光显微镜下检测发现,腺病毒在原代肝细胞中具有较高的转染效率.实时荧光定量PCR结果表明,当转染Ad-miRNA-291b-3p时,原代肝细胞中micro RNA-291 b-3p的表达水平升高；反之,当转染Ad-antisense-miRNA-291b-3p时,原代肝细胞中micro RNA-291b-3p的表达水平明显受到抑制.Western blot结果表明,当micro RNA-291b-3p高表达时,原代肝细胞中胰岛素信号通路受阻；相反,当micro RNA-291b-3p受到抑制时,胰岛素信号通路得到改善.结论 micro RNA-291b-3p在糖尿病小鼠中的表达水平明显升高.原代肝细胞中,micro RNA-291b-3p的异常升高会导致胰岛素抵抗.
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