【摘 要】
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目的 探索一种基于成簇的规律间隔的短回文重复序列（CRISPR）和反转录重组酶介导的等温扩增（RTRAA）技术HIV核酸检测新方法的可行性。方法 在HIV网络数据库www.hiv.lanl.gov下载HIV CRF07＿BC亚型基因序列，根据保守序列设计RT-RAA引物和crRNA。通过荧光法CRISPR核酸检测筛选crRNA；利用梯度稀释的HIV RNA模板评价荧光法和试纸法CRISPR核酸检测
【机 构】
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南阳师范学院生命科学与农业工程学院
【基金项目】
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国家“十三五”科技重大专项（2018ZX10301-407-005-001,2018ZX10301-407-003-001,2018ZX10302-103-001-003）～～；
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目的 探索一种基于成簇的规律间隔的短回文重复序列（CRISPR）和反转录重组酶介导的等温扩增（RTRAA）技术HIV核酸检测新方法的可行性。方法 在HIV网络数据库www.hiv.lanl.gov下载HIV CRF07＿BC亚型基因序列，根据保守序列设计RT-RAA引物和crRNA。通过荧光法CRISPR核酸检测筛选crRNA；利用梯度稀释的HIV RNA模板评价荧光法和试纸法CRISPR核酸检测的灵敏度；利用6种病原体核酸和不同亚型的HIV临床样本评价该方法的特异性。结果 从5条候选的crRNA中筛选出了1条检测灵敏度较高的crRNA；荧光法和试纸法CRISPR核酸检测HIV RNA的灵敏度均为10拷贝/μL，与RT-qPCR法的灵敏度一致。荧光法和试纸法CRISPR核酸检测均可特异性检出HIV CRF07＿BC亚型，与其他病原体核酸无明显交叉反应。在20例HIV临床样本检测中，试纸法CRISPR核酸检测准确检出了10例CRF07＿BC以及1例B亚型。结论 本研究建立了针对HIV CRF07＿BC亚型的CRISPR核酸检测方法，具有便携、快速、高灵敏度和特异性的特点，为HIV感染者的检测和抗病毒治疗过程监测提供新的方法。
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