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摘 要：目的：以滇丹参为研究对象，探索提取与纯化其丹酚酸B成分的最佳工艺。方法：将丹酚酸B成分在滇丹参的具体含量当做评价指标，通过展开正交试验来确定纯化与提取工作的最优条件。结果：通过正交试验，可以明确，如果需要保障丹酚酸B物质的含量，应当将8倍量的水设置为提取条件，煎煮两次，每次花费1h，选用的絮凝沉降剂为ZTC11+1，药液的基本浓度应当为1g/5mL，絮凝剂的实际用量为B：A=4：2，搅拌速度应当控制在100r/min。结论：在对丹酚酸B这一重要成分进行提取以及后续纯化处理工作时，应当先完成精制水提掖的工作，使用絮凝澄清的方法，可以减少杂质的含量。
关键词：滇丹参；丹酚酸B；提取工艺；纯化工艺
技术人员对鼠尾草的根茎以及根展开干燥处理工作之后，可以获取滇丹参，其味道微苦，性属微寒，该中药药材具有散瘀、活血以及调经等常用功效，同时还能发挥出止痛镇静的作用，在治疗患者出现的子宫出血、风湿痹痛以及月经不调等症状时可使用滇丹参药材，该药材中的丹酚酸B挥主要作用，其丹酚酸B成分具有相对较强的活性，直接关系滇丹参的药效，检测该药材的质量与药用价值时，也应当重点关注丹酚酸B，确定纯化与提取工艺技术的使用情况。
1 材料与方法
1.1 一般材料
仪器：Waters e2695型高效液相色谱仪；FB124型电子分析天平；SK250HP型超声提取器。
试药：丹酚酸B对照品；滇丹参；ZTC1+1天然澄清剂；乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水；其它试剂均为分析纯。
1.2 方法
制备对照品溶液时，需要采用精密称取的方法来参考技术应用标准，称取适量的对照品，添加75%的甲醇，制备出所需的溶液，做好色谱条件的控制工作，设置流动相、流速与检测波长与柱温等参数，在提纯过程中应当始终做好参数控制工作，而后需要继续考察相应的线性关系，完成测定样品含量的工作。
精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液，即得。色谱条件：Agilent-C18色谱柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-甲酸-水体积比（26∶9∶1∶64）为流动相；柱温：35 ℃；检测波长：286 nm；流速：0.8 mL/min；理论塔板数按丹酚酸B计不低于2000。
分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在上述色谱条件下依次进样测定。以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样量为横坐标进行线性回归，得到回归方程为Y=895054x-68669，相关系数r=0.9999。结果表明丹酚酸B进样量在0.768～2.688 μg范围内与峰面积呈现良好线性关系。
设计方案：以加水量、提取时间、提取次数为考察因素，以丹酚酸B含量为评价指标，每个因素选取3个水平，采用正交表L9（34）安排试验，
称取药材9份，每份20 g，按照正交实验表进行试验，滤液浓缩并定容到500 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，精密吸取溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定。
ZTC1+1澄清剂溶液的配制：A组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂A组分1 g，先用少量蒸馏水搅成糊状，然后加蒸馏水至100mL，溶胀24 h，搅匀，双层纱布滤过，即得1 %A 组分黏胶液； B组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂B组分1 g，用少量1 %醋酸溶液溶解并搅成糊状，然后加1 %醋酸至100 mL，溶胀24 h，搅匀，双层纱布滤过，即得1 %B 组分黏胶液。经过预实验，发现丹酚酸B在60 ℃时絮凝效果较好，故以60 ℃为絮凝温度，采用正交试验对絮凝澄清工艺的主要工艺参数进行优化。
2 结果
提取溶剂的选择：分别称取40 g（准确到0.01 g）药材4份，分别以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇为溶剂，加入8倍量溶剂提取1.5 h，过滤，滤渣再用6倍量溶剂提取1 h，合并滤液，浓缩并定容到500 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，精密吸取10 μL溶液，注入液相色谱仪，测定丹酚酸B的含量，结果分别为2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水为溶剂时，与30%乙醇提取率相差不大，因考虑实际生产的需要，故以水为提取溶剂。
根据直观分析结果表明，紫丹参的最佳水提工艺为8倍量水，提取3次，每次1 h，即A2B1C3 。由于提取3次和2次的结果相差不大，为了节约成本，将工艺定为8倍量水，提取2次，每次1 h，即A2B1C2。
直观分析可知，影响絮凝澄清的因素顺序为：药液浓缩比>絮凝剂组分比>搅拌速度，最佳工艺组合为A1B1C2。方差分析显示，药液浓度对精制工艺具有显著性影响。
验证试验：平行取相同量的药液3份，每份50 mL。按上述确定的最佳工艺条件进行验证。同时测得丹酚酸B含量分别为35.62、35.85、35.77 mg/g，验证结果与正交试验相符。
3 讨论
相关人员对滇丹参展开药理方面的研究工作时，对其具有的主要药理作用进行了充分地认识，发现其可以对人体的冠状动脉系统产生影响，使其血流量明显增加，避免使患者形成血栓的问题，同时还能对血小板的聚集起到抑制作用，将原有的血粘度减低，将自由基消除，使血管内皮的功能被改善，血管在损伤之后，也不会出现过于活跃的血液增生活动，该药材可以帮助使用者预防冠心病，患者接受血管成形术之后，可使用该药材来防治血管再狭窄的问题。
滇丹参具有的多重药理功效都非常重要，其背部含有的丹参酮成分具有突出的脂溶性，同时其内部还含有酚酸类成分，这些成分具有不同程度的水溶性特点，本文研究的丹酚酸B的含量相对比较高，主要有1分子咖啡酸与3分子丹酚素两种重要成分缩合而成，具有良好的活性，可以发挥出抗氧化以及清除自由基的作用，评测滇丹参的质量时，也可以将丹酚酸B这一成分的具体含量当做评测指标，选用常规的提取工艺技术，以高效的絮凝澄清型纯化方法来处理该药材，尽可能多地提取丹酚酸B成分。
提取丹酚酸B这一成分时，应当注意到其在水提掖中存在的不稳定的问题，如果提取工作消耗的时间过长，或者实际温度过高，丹酚酸B这一重要成分的含量会因受到影响而降低，因此在提取与纯化的活动中，都应当关注丹酚酸B存有的降解问题。
完成純化工艺研究之后确定，控制药液浓缩比时，应当将其设定在1：5（g/mL），丹酚酸B成分的保留率可以保持在最高水平，如果药液相对比较稀，丹酚酸B有效成分的含量也会随之降低。当A组分增加之后，絮凝剂组分比也会随之增加，丹酚酸B物质的含量因此而降低，如果组分比可以控制为4/2，提取的效果可达到最佳。
本次选用的絮凝澄清剂在被使用时可将其良好的选择性呈现出来，药物中的蛋白质、较直等可与该澄清剂选择性地共沉，同时与其他类型的絮凝剂相比，其不仅使用相对简便，同时还具有安全无毒的功效，不会给药材中的其他有效成分造成影响，在水提纯工艺技术中，其使用效果优于普通的乙醇，可以帮助缩短药材加工的周期，控制提纯成分，经由该种澄清剂制备出的干膏类药品具有良好的吸湿性。
因此可知在处理滇丹参药材时，需要控制精制水提液的工作，陈家勇絮凝澄清的方法相对关键，采用絮凝澄清的的技术手段之后，絮凝剂的使用量被缩小，试验造成的污染也比较少，在纯化与提取的环节中也不会出现过多地损失丹酚酸B成分的问题，因此可在制药过程中推广该技术手段。
参考文献
[1]徐桃枝，晏永新，何爱英，廖春玲.（丹参总酚酸纯化工艺研究[J].江西化工，2018（2）.
[2]石功德，周静，李敏，虞立，金伟锋，李晓红.基于r语言的益气活血方药中丹酚酸b提取工艺研究[J].中国中医急症，2017（10），1700-1702.
[3]曾文雪.交联聚维酮与丹参中丹酚酸b的配伍研究[J].江西中医药，2017，48（11），63-66.
关键词：滇丹参；丹酚酸B；提取工艺；纯化工艺
技术人员对鼠尾草的根茎以及根展开干燥处理工作之后，可以获取滇丹参，其味道微苦，性属微寒，该中药药材具有散瘀、活血以及调经等常用功效，同时还能发挥出止痛镇静的作用，在治疗患者出现的子宫出血、风湿痹痛以及月经不调等症状时可使用滇丹参药材，该药材中的丹酚酸B挥主要作用，其丹酚酸B成分具有相对较强的活性，直接关系滇丹参的药效，检测该药材的质量与药用价值时，也应当重点关注丹酚酸B，确定纯化与提取工艺技术的使用情况。
1 材料与方法
1.1 一般材料
仪器：Waters e2695型高效液相色谱仪；FB124型电子分析天平；SK250HP型超声提取器。
试药：丹酚酸B对照品；滇丹参；ZTC1+1天然澄清剂；乙腈、甲醇为色谱纯；水为去离子水；其它试剂均为分析纯。
1.2 方法
制备对照品溶液时，需要采用精密称取的方法来参考技术应用标准，称取适量的对照品，添加75%的甲醇，制备出所需的溶液，做好色谱条件的控制工作，设置流动相、流速与检测波长与柱温等参数，在提纯过程中应当始终做好参数控制工作，而后需要继续考察相应的线性关系，完成测定样品含量的工作。
精密称取丹酚酸B对照品适量，加75%甲醇制成每1 mL含0.192 mg的溶液，即得。色谱条件：Agilent-C18色谱柱（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-乙腈-甲酸-水体积比（26∶9∶1∶64）为流动相；柱温：35 ℃；检测波长：286 nm；流速：0.8 mL/min；理论塔板数按丹酚酸B计不低于2000。
分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液4、6、8、10、12、14μL，在上述色谱条件下依次进样测定。以峰面积积分值为纵坐标，对照品的进样量为横坐标进行线性回归，得到回归方程为Y=895054x-68669，相关系数r=0.9999。结果表明丹酚酸B进样量在0.768～2.688 μg范围内与峰面积呈现良好线性关系。
设计方案：以加水量、提取时间、提取次数为考察因素，以丹酚酸B含量为评价指标，每个因素选取3个水平，采用正交表L9（34）安排试验，
称取药材9份，每份20 g，按照正交实验表进行试验，滤液浓缩并定容到500 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，精密吸取溶液10 μL，注入液相色谱仪，测定。
ZTC1+1澄清剂溶液的配制：A组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂A组分1 g，先用少量蒸馏水搅成糊状，然后加蒸馏水至100mL，溶胀24 h，搅匀，双层纱布滤过，即得1 %A 组分黏胶液； B组分溶液的配制 称取ZTC1+1Ⅲ澄清剂B组分1 g，用少量1 %醋酸溶液溶解并搅成糊状，然后加1 %醋酸至100 mL，溶胀24 h，搅匀，双层纱布滤过，即得1 %B 组分黏胶液。经过预实验，发现丹酚酸B在60 ℃时絮凝效果较好，故以60 ℃为絮凝温度，采用正交试验对絮凝澄清工艺的主要工艺参数进行优化。
2 结果
提取溶剂的选择：分别称取40 g（准确到0.01 g）药材4份，分别以水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇为溶剂，加入8倍量溶剂提取1.5 h，过滤，滤渣再用6倍量溶剂提取1 h，合并滤液，浓缩并定容到500 mL，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，精密吸取10 μL溶液，注入液相色谱仪，测定丹酚酸B的含量，结果分别为2.18%、2.45%、2.37%、2.09%。表明30%乙醇提取含量最高，但以水为溶剂时，与30%乙醇提取率相差不大，因考虑实际生产的需要，故以水为提取溶剂。
根据直观分析结果表明，紫丹参的最佳水提工艺为8倍量水，提取3次，每次1 h，即A2B1C3 。由于提取3次和2次的结果相差不大，为了节约成本，将工艺定为8倍量水，提取2次，每次1 h，即A2B1C2。
直观分析可知，影响絮凝澄清的因素顺序为：药液浓缩比>絮凝剂组分比>搅拌速度，最佳工艺组合为A1B1C2。方差分析显示，药液浓度对精制工艺具有显著性影响。
验证试验：平行取相同量的药液3份，每份50 mL。按上述确定的最佳工艺条件进行验证。同时测得丹酚酸B含量分别为35.62、35.85、35.77 mg/g，验证结果与正交试验相符。
3 讨论
相关人员对滇丹参展开药理方面的研究工作时，对其具有的主要药理作用进行了充分地认识，发现其可以对人体的冠状动脉系统产生影响，使其血流量明显增加，避免使患者形成血栓的问题，同时还能对血小板的聚集起到抑制作用，将原有的血粘度减低，将自由基消除，使血管内皮的功能被改善，血管在损伤之后，也不会出现过于活跃的血液增生活动，该药材可以帮助使用者预防冠心病，患者接受血管成形术之后，可使用该药材来防治血管再狭窄的问题。
滇丹参具有的多重药理功效都非常重要，其背部含有的丹参酮成分具有突出的脂溶性，同时其内部还含有酚酸类成分，这些成分具有不同程度的水溶性特点，本文研究的丹酚酸B的含量相对比较高，主要有1分子咖啡酸与3分子丹酚素两种重要成分缩合而成，具有良好的活性，可以发挥出抗氧化以及清除自由基的作用，评测滇丹参的质量时，也可以将丹酚酸B这一成分的具体含量当做评测指标，选用常规的提取工艺技术，以高效的絮凝澄清型纯化方法来处理该药材，尽可能多地提取丹酚酸B成分。
提取丹酚酸B这一成分时，应当注意到其在水提掖中存在的不稳定的问题，如果提取工作消耗的时间过长，或者实际温度过高，丹酚酸B这一重要成分的含量会因受到影响而降低，因此在提取与纯化的活动中，都应当关注丹酚酸B存有的降解问题。
完成純化工艺研究之后确定，控制药液浓缩比时，应当将其设定在1：5（g/mL），丹酚酸B成分的保留率可以保持在最高水平，如果药液相对比较稀，丹酚酸B有效成分的含量也会随之降低。当A组分增加之后，絮凝剂组分比也会随之增加，丹酚酸B物质的含量因此而降低，如果组分比可以控制为4/2，提取的效果可达到最佳。
本次选用的絮凝澄清剂在被使用时可将其良好的选择性呈现出来，药物中的蛋白质、较直等可与该澄清剂选择性地共沉，同时与其他类型的絮凝剂相比，其不仅使用相对简便，同时还具有安全无毒的功效，不会给药材中的其他有效成分造成影响，在水提纯工艺技术中，其使用效果优于普通的乙醇，可以帮助缩短药材加工的周期，控制提纯成分，经由该种澄清剂制备出的干膏类药品具有良好的吸湿性。
因此可知在处理滇丹参药材时，需要控制精制水提液的工作，陈家勇絮凝澄清的方法相对关键，采用絮凝澄清的的技术手段之后，絮凝剂的使用量被缩小，试验造成的污染也比较少，在纯化与提取的环节中也不会出现过多地损失丹酚酸B成分的问题，因此可在制药过程中推广该技术手段。
参考文献
[1]徐桃枝，晏永新，何爱英，廖春玲.（丹参总酚酸纯化工艺研究[J].江西化工，2018（2）.
[2]石功德，周静，李敏，虞立，金伟锋，李晓红.基于r语言的益气活血方药中丹酚酸b提取工艺研究[J].中国中医急症，2017（10），1700-1702.
[3]曾文雪.交联聚维酮与丹参中丹酚酸b的配伍研究[J].江西中医药，2017，48（11），63-66.