【摘 要】
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目的通过构建非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L，在细胞和小鼠体内分别评价病毒毒力。方法通过同源重组构建非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L，通过病毒的细胞扩散能力和复制能力，以及小鼠呼吸道感染实验和小鼠尾部划痕实验分别评估NTV-C7L的体外和体内毒力。结果经同源重组蓝白斑纯化获得的非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L，通过PCR和Western blot鉴定证明C7L基因正确插入并能表达C7L
【机 构】
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中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京 102206,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京 102206,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所，北京 102206,中国疾病预防控制中心病毒病
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目的通过构建非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L，在细胞和小鼠体内分别评价病毒毒力。
方法通过同源重组构建非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L，通过病毒的细胞扩散能力和复制能力，以及小鼠呼吸道感染实验和小鼠尾部划痕实验分别评估NTV-C7L的体外和体内毒力。
结果经同源重组蓝白斑纯化获得的非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L，通过PCR和Western blot鉴定证明C7L基因正确插入并能表达C7L蛋白；在人胚肺成纤维细胞(MRC-5)和小鼠胚胎成纤维细胞(BALB/C 3T3)中，NTV-C7L的扩散能力和复制能力比NTV强，但低于VTT；痘苗病毒小鼠滴鼻实验结果表明，106PFU病毒感染后TTV组小鼠体重与NTV及NTV-C7L组相比，体重下降差异具有统计学意义(t＝6.56, P<0.001；t＝5.73, P<0.001)，NTV组与NTV-C7L组相比，体重下降差异无统计学意义(t＝0.597，P＝0.081)；107PFU病毒感染后，NTV组及NTV-C7L组体重下降与TTV组相比，差异具有统计学意义(t＝12.86, P<0.001；t＝10.71, P<0.001)。NTV组与NTV-C7L组相比，体重下降差异具有统计学意义(t＝4.616，P<0.001)。小鼠尾部皮肤划痕实验表明，接种106PFU VTT组小鼠在第5天尾部形成较为明显皮肤红肿、损伤，而107PFU NTV组和NTV-C7L组仅在局部形成红肿，且范围较VTT小，后逐渐结痂愈合。
结论非复制型痘苗病毒修饰株NTV-C7L在细胞内及小鼠体内毒力较NTV升高，但明显低于VTT，为痘苗病毒载体优化及应用提供了参考数据。
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