【摘 要】
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背景：酪蛋白激酶2结合蛋白1（casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1）是一种重要的骨形成负调控基因，其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物，对大多数编码基因具有调控作用，在成骨分化中发挥重要作用。目的：探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法：采用mi
【基金项目】
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河南省医学科技攻关计划项目（LHGJ20200842）；
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背景：酪蛋白激酶2结合蛋白1（casein kinase 2-interaction protein-1,CKIP-1）是一种重要的骨形成负调控基因，其敲除鼠骨质显著增强、骨形成和骨密度也显著提高。而miRNA作为较早发现的小分子调控物，对大多数编码基因具有调控作用，在成骨分化中发挥重要作用。目的：探讨miRNA/CKIP-1对骨质疏松患者骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其分子机制。方法：采用miRNA-Seq技术检测2022年3-6月在开封市中心医院骨外科就诊32例骨质疏松患者及同期体检中心健康人群骨髓间充质干细胞中miRNA的变化情况；利用Targetscan网站预测靶向调控CKIP-1的miRNA，利用荧光素酶报告基因实验检测miRNA与CKIP-1启动子区DNA的结合；在骨髓间充质干细胞中转染miR-192-5p类似物（miR-192-5p mimics）/阴性对照（NC mimics）或miR-192-5p抑制剂（miR-192-5p inhibitor）/阴性对照（NC inhibitor），成骨诱导后第7,14天，通过实时荧光定量PCR技术及茜素红染色检测成骨标志基因Runt相关转录因子2（Runx2）、骨钙素、抗骨桥蛋白、骨唾液蛋白及CKIP-1的表达水平和骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的情况；采用蛋白质免疫印迹实验及茜素红染色检测miR-192-5p/CKIP-1/轴对细胞成骨分化的的调控作用。结果与结论：与健康组相比，骨质疏松组有16个miRNA表达明显升高，53个miRNA表达明显降低（P ＜0.05）；利用Targetscan网站预测，并通过荧光素酶报告基因实验验证，发现miR-192-5p与CKIP-1有互补的核苷酸序列（P ＜0.05）；过表达miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著升高（P ＜0.05），抑制miR-192-5p,Runx2、骨钙素、骨桥素和骨唾液蛋白的表达水平显著降低（P ＜0.05），而沉默CKIP-1的表达后，Runx2、骨钙素及骨桥素的蛋白水平增加（P ＜0.05），逆转了敲低miR-192-5p对细胞成骨分化的抑制作用。上述结果证实，miR-192-5p在骨质疏松症中表达降低；miR-192-5p通过靶向抑制CKIP-1的表达，促进骨髓间充质干细胞成骨分化。
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