B淋巴细胞刺激因子基因的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

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【摘要】

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聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134-285AA)的cDNA片段,该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体.测序表明除(ATA263→ATG263)突变并导致了氨基酸(12

【作者】

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王锦之周卿周宇荀马昱澍魏东芝

【机构】

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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

【出处】

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华东理工大学学报：自然科学版

【发表日期】

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2005年2期

【关键词】

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B淋巴细胞刺激因子大肠杆菌克隆和表达丝裂霉素协同作用 B lymphocyte stimulator E.coli cloning and expr

【基金项目】

：

上海市重点学科建设项目

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聚合酶链式反应(PCR)扩增获得了编码BLys(134-285AA)的cDNA片段,该片段以限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ双酶切插入pET32a载体.测序表明除(ATA263→ATG263)突变并导致了氨基酸(1263M)突变外,其余序列与Genbank报道的序列一致.蛋白表达用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,SDS-PAGE表明:在33 ku处有明显的融合蛋白表达,其表达水平高达总菌体蛋白的50%.点印迹证实融合蛋白能与anti-His6Tag抗体反应.生物学活性研究表明BLys协同丝裂

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