【摘 要】
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为建立一种检测牛冠状病毒（BCoV）的抗体间接ELISA检测方法，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白，并作为包被抗原，建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法，应用于临床样品检测。结果显示，S1蛋白大小约100 ku，可表达于昆虫High5细胞培养基上清，经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好；经反应条件优化，确定抗原包被浓度为0.125 μg·mL-1，血清稀
【基金项目】
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“十四五”国家重点研发计划（2021YFD1801101）； 贵州省种业发展项目（肉牛遗传改良与高效养殖技术研究）；
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为建立一种检测牛冠状病毒（BCoV）的抗体间接ELISA检测方法，本研究利用昆虫杆状病毒表达系统表达BCoV的S1蛋白，并作为包被抗原，建立BCoV的S1蛋白抗体间接ELISA检测方法，应用于临床样品检测。结果显示，S1蛋白大小约100 ku，可表达于昆虫High5细胞培养基上清，经Western blot鉴定S1蛋白抗原性良好；经反应条件优化，确定抗原包被浓度为0.125 μg·mL-1，血清稀释度为1∶200；采用1%明胶，于37 ℃封闭3 h；血清样品于37 ℃孵育30 min；酶标二抗的稀释度1∶25 000，37 ℃孵育45 min；37 ℃避光显色13 min；临界值为0.297；经检验，该方法特异性良好；批间及批内变异系数均小于10％。当临界值为OD450 nm为0.297时，若以IFA为标准，ELISA的敏感性为96.88%（31/32），特异性为87.50%（7/8），与IFA具有很强的一致性（κ=0.844，P＜0.01）；若以中和试验为标准，ELISA的敏感性为100.00%（31/31），特异性为88.89%（8/9），与血清中和试验具有很强的一致性（κ=0.925，P＜0.01）。采用该方法对303份牛血清进行检测，BCoV阳性率为74.91%。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强，敏感性高，重复性好，可用于BCoV的血清学调查和临床诊断，并可以应用于替代中和试验检测BCoV免疫后抗体水平。
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