论文部分内容阅读
目的 建立稳定高表达人IgE Cε2-4蛋白(E24)的工程细胞株,考察E24蛋白与膜受体(FceR Ⅰ)的结合.方法 从SKO-007细胞中钓取E24基因,分别克隆人真核表达载体PcDNA3.1(+)(需要在E24基因前加信号肽序列)和pCMV-L载体;瞬时转染293T细胞,利用双夹心ELISA法鉴定转染上清中的目的 蛋白;选择表达量相对高的质粒转染CHO细胞,G418筛选获得稳定细胞株;RT-PCR法在转录水平上检测E24基因,ELISA法鉴定稳定株上清中的E24蛋白,流式细胞术检测E24蛋白与FceR Ⅰ的结合.结果 成功构建了3种真核表达质粒SP-E24-P3.1、SP Ⅱ.E24-P3.1和E24-PL,瞬时转染293T细胞,上清中的目的 蛋白表达量分别为19.1、19.4和8.7μg/ml.以质粒SPⅡ-E24-P3.1转染CHO细胞,经3轮亚克隆获得了2株稳定高表达E24蛋白的细胞株,表达量均超过25 μg/ml.RT-PCR可扩增出细胞株中的E24基因;流式细胞术显示E24蛋白可以与FceR Ⅰ呈剂量依赖性的结合.结论 经筛选获得了2株表达E24蛋白的工程细胞株,且E24可以特异性的结合FceRⅠ。