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[目的]构建H9N2禽流感病毒(AIV)纳米抗体(Nbs)酵母双杂交文库,为后期筛选H9N2 AIVNbs奠定基础.[方法]以H9亚型禽流感疫苗(F株)免疫双峰驼,当血凝抑制(HI)抗体滴度大于1:24时,颈静脉采集血液,分离淋巴细胞并提取淋巴细胞总RNA,用反转录试剂盒合成第一链cDNA,再以此为模板,通过巢式PCR扩增Nbs基因片段.将Nbs基因与pGADT7-Rec载体共转至Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30 ℃倒置培养约4 d,收集平板上的全部菌落,构建H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,并对文库库容、滴度、重组效率和多样性进行鉴定.[结果]经H9亚型禽流感疫苗连续免疫4次后,双峰驼HI抗体滴度可达1:29;通过巢式PCR成功扩增出400 bp的Nbs基因.对构建的H9N2AIV Nbs酵母双杂交文库的鉴定表明,其库容为2.4X108,滴度为4.2X 109 CFU/mL,插入重组率为95.6％;随机挑取10个克隆测序,结果显示均符合Nbs序列特征,且为独立克隆,表明文库多样性良好.[结论]成功构建了H9N2 AIV Nbs酵母双杂交文库,且文库各项指标均达到了要求.