【摘 要】
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[背景]诺如病毒是引起人类急性胃肠炎的主要食源性病原体.目 前尚无获批的诺如病毒疫苗和药物,诺如病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)是当前抗诺如病毒药物开发的主要靶点.[目的]表达我国诺如病毒易重组基因型GII.P12/GII.3毒株的RdRp并系统地表征其复制特征.[方法]基于大肠杆菌系统表达并纯化得到高纯度可溶性的GII.P12/GII.3诺如病毒RdRp蛋白,通过体外RNA合成实验确定温度、模板、底物和盐浓度对RdRp功能的影响.[结果]GII.P12/GII.3诺如病毒的RdRp在30℃、1
【机 构】
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广东省科学院微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室广东省微生物安全与健康重点实验室农业农村部农业微生物组学与精准应用重点实验室,广东广州510070
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[背景]诺如病毒是引起人类急性胃肠炎的主要食源性病原体.目 前尚无获批的诺如病毒疫苗和药物,诺如病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)是当前抗诺如病毒药物开发的主要靶点.[目的]表达我国诺如病毒易重组基因型GII.P12/GII.3毒株的RdRp并系统地表征其复制特征.[方法]基于大肠杆菌系统表达并纯化得到高纯度可溶性的GII.P12/GII.3诺如病毒RdRp蛋白,通过体外RNA合成实验确定温度、模板、底物和盐浓度对RdRp功能的影响.[结果]GII.P12/GII.3诺如病毒的RdRp在30℃、1 mmol/L氯化锰条件下酶活性最佳.酶动力学实验表明底物GTP和模板polyC的Km值分别为79.0 μmol/L和10.6 μg/mL.体外抑制试验表明,RdRp在微摩尔范围内可被利巴韦林、法维拉韦和NF023有效抑制,半数最大抑制浓度分别为23、59和11 μmol/L.[结论]首次表征了诺如病毒易重组基因型GII.P12/GII.3毒株RdRp的酶学特性.基于荧光的酶活性测试表明,RdRp在体外具有催化活性,这为诺如病毒RdRp抑制剂的筛选及诺如病毒感染的治疗提供了良好的技术和理论支持.
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