【摘 要】
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[目的]本文旨在挖掘满足工业加工所需的新型耐热β-甘露聚糖酶.[方法]从丝状真菌喜热梭孢壳中克隆甘露聚糖酶基因Mtman1,利用毕赤酵母表达系统进行异源表达,研究重组酶的酶学性质和热处理过程中蛋白构象变化情况.[结果]序列分析显示,Mtman1基因编码409个氨基酸,包含一段20个氨基酸的信号肽序列和一个GH5家族结构域;经毕赤酵母表达的重组MtMAN1蛋白约为60 kDa,存在N-糖基化修饰,该酶的最适反应pH和温度分别为6.0和70℃,催化刺槐豆胶底物的Km和Vmax分别为4.28±0.73 mg/m
【机 构】
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浙江万里学院生物与环境学院,浙江宁波315100;浙江大学动物科学学院,浙江杭州310058;浙江中医药大学基础医学院,浙江杭州 310053;浙江万里学院生物与环境学院,浙江宁波315100;浙江大
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[目的]本文旨在挖掘满足工业加工所需的新型耐热β-甘露聚糖酶.[方法]从丝状真菌喜热梭孢壳中克隆甘露聚糖酶基因Mtman1,利用毕赤酵母表达系统进行异源表达,研究重组酶的酶学性质和热处理过程中蛋白构象变化情况.[结果]序列分析显示,Mtman1基因编码409个氨基酸,包含一段20个氨基酸的信号肽序列和一个GH5家族结构域;经毕赤酵母表达的重组MtMAN1蛋白约为60 kDa,存在N-糖基化修饰,该酶的最适反应pH和温度分别为6.0和70℃,催化刺槐豆胶底物的Km和Vmax分别为4.28±0.73 mg/mL和203.9±14.61 μmol/(s.mg);MtMAN1在60℃下十分稳定,在80℃、90℃和100℃下处理10 min后,分别能维持(68.23±7.47)％、(56.01±5.69)％和(14.91±2.92)％的残余活性,且二级结构和最大发射波长基本没有发生变化,提示其构象维持稳定;此外,该酶对较低浓度的Fe2+(＜0.1 mmol/L)、Cu2+ (＜0.1 mmol/L)、Ca2+ (＜0.5 mmol/L)、Mg2+ (＜0.1 mmol/L)或Zn2+ (＜0.1 mmol/L)耐受能力较强.[结论]MtMAN1是一种耐热的β-甘露聚糖酶,在饲料制粒等需要高温处理的工业加工工艺中具有较好的应用前景.
其他文献
[目的]ZntR是一种金属调控蛋白,可催化锌外排基因的转录激活,防止细胞内二价Zn离子过量,但其对细菌生理功能的影响目前尚不清楚.[方法]本研究构建了嗜水气单胞菌ATCC7966(Aeromonas hydrophila,A.h)的zntR缺失株及补救株,对菌株的生物被膜形成能力、溶血活性、运动能力和响应金属离子胁迫等生理表型进行评估.[结果]敲除zntR基因的菌株对锌和铬离子胁迫敏感、对钴离子胁迫耐受,并且生物被膜形成能力下降、运动能力增强,这些表型在其补救菌株中均能得到恢复.进一步利用DIA定量蛋白质
目的 分析呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)F蛋白融合前、融合后构象及其三聚体;比较不同细胞表达的融合前RSV F蛋白(Pre-F)的活性.方法 分别构建和制备含有Pre-F和融合后RSV F蛋白(Post-F)基因的重组质粒,转染Xten293或者XtenCHO细胞后,收获上清进行蛋白纯化.然后,利用融合前特异性抗体D25和AM14通过Western blotting和ELISA对纯化后的RSV F蛋白进行融合前、融合后构象验证和聚体分析,并对不同细胞表达的
M蛋白是新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基因组编码的一种非糖基化膜相关蛋白,主要位于病毒囊膜内表面,构成病毒囊膜与核衣壳连接的支架.研究表明,M蛋白是一种细胞核-细胞质穿梭蛋白,在抑制细胞基因转录和蛋白质合成以及协助病毒粒子组装和出芽方面发挥了重要作用.目前,国内外对NDV毒力和复制的关系研究主要集中在病毒的F、HN和V蛋白以及RNP复合体,但是近年来研究人员利用反向遗传操作技术研究发现M蛋白与NDV毒力和复制也存在一定的联系.因此,本文主要对NDVM蛋白的结构特征、M
目的 分析2010—2019年锦州市病毒性肝炎发病趋势和流行病学特征,为制定针对性的防控措施提供科学依据.方法 采用描述流行病学方法,对中国疾病预防控制信息系统2010—2019年锦州市病毒性肝炎疫情资料进行分析,组间比较采用 χ2检验.结果 2010—2019年锦州市病毒性肝炎报告病例18519例,年均发病率为59.61/10万,发病率年度差异有统计学意义(χ2=120.39,P74岁组发病都比较少,报告病例年龄组间差异有统计学意义(χ2=53.90,P<0.05).农民在病毒性肝炎报告病例中占绝大多数
[目的]随着合成生物学的发展,通过在细菌体内设计合成复杂、多功能的基因线路进行靶向治疗已经取得巨大进展.虽然这种使用细菌作为治疗传递系统,选择性地在体内释放有效治疗成分的方式具有极大优势,但是如何使细菌在代谢负荷增加较低的情况下有效地分泌功能蛋白并发挥作用依旧是一个难题.[方法]针对这一难题,本研究提供了一种新的策略,即以细菌中广泛存在的蛋白类杀菌素和丝状噬菌体等相关编码基因作为生物模块,通过对铜绿假单胞菌的这些内源生物模块的重新编排和组装,构建了一种能在特定条件下裂解并投放功能蛋白的工程菌.为了评价工程
手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)是一种病毒性传染病,主要由肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)与柯萨奇病毒A组(Coxsackievirus A,CVA)16型等肠道病毒引起.HFMD具有传染性较强、传播途径多和传播范围广的特点.对于中国的儿童已造成了极大的公共卫生安全隐患,尤其是5岁以下儿童.HFMD的发病具有季节性、发病率高且临床表现多样,一旦暴发和流行将严重威胁儿童的身体健康.国内接种的EV71灭活疫苗是有效防控HFMD的措施之一,但该疫苗仅能
[目的]通过研究不同食源米曲霉菌株对高效氯氰菊酯(beta-cypermethrin,β-CP)及其必经代谢产物3-苯氧基苯甲酸(3-phenoxybenzoic acid,3-PBA)的降解特性,了解不同菌株的降解共性及差异性,为农副产品和发酵食品的农残减除提供理论基础和食品用安全微生物资源.[方法]以发酵食品为菌源,通过形态学鉴定、ITS测序和菌株产黄曲霉毒素B1 (AFB1)的测定筛选鉴定米曲霉菌株,采用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱-质谱法(LC-MS)对米曲
[目的]枯草芽孢杆菌能有效诱导肠道黏膜免疫应答,但活化黏膜下树突状细胞(DC)的具体机制不完全清楚.[方法]本研究首先用不同浓度枯草芽孢杆菌刺激小鼠肠上皮CMT93细胞,用荧光定量PCR和ELISA检测细胞因子表达水平,然后将枯草芽孢杆菌刺激细胞的培养上清与小鼠骨髓源树突状细胞(BMDC)进行共孵育,用流式细胞术检测BMDC活化标志,最后用RNA干扰技术证明IL-33在活化BMDC中的作用.[结果]枯草芽孢杆菌能显著刺激CMT93细胞分泌IL-6、IL-33和IFN-γ等细胞因子,对刺激IL-33表达呈现
[目的]解析中国传统豆瓣酱发酵过程中的微生物群落演替规律和理化代谢物质变化,探讨不同发酵阶段影响豆瓣酱风味的核心功能微生物.[方法]采用高通量测序解析豆瓣酱发酵过程中的微生物群落结构和演替,并跟踪检测发酵过程中的理化代谢物质,然后分析微生物群落和理化代谢物质变化之间的相关性,最后在体外分离核心微生物并对其功能特性进行验证.[结果]细菌和真菌群落结构在发酵前期显著变化,并在中后期逐渐趋于稳定.优势细菌主要是Staphylococcus、Bacillus和Weisiella,其中Staphylococcus在
单一微生物降解水稻秸秆效果不明显,多种微生物组合在一起的微生物菌群能够有效降解水稻秸秆,是当前降解秸秆类废物的首要选择.[目的]探究微生物菌群比单一菌株转化秸秆效率提高的种间协作机制,为改善秸秆类物质的生物降解过程提供理论参考.[方法]通过菌种组合,以水稻秸秆减重率为指标人工构建出降解效果优于单菌培养的微生物群体组合,利用分子生物学方法对实验菌株进行鉴定,结合纤维素酶活性、发酵产物GC-MS分析等指标得出水稻秸秆降解时微生物群体的种间协作机制.[结果]菌株B (Bacillus cereus)在30℃培养