【摘 要】
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目的 探讨异性核基质结合区结合蛋白-1(SATB1)短发夹核糖核酸(shRNA)对高表达SATB1的人胶质瘤细胞株U251和SHG44增殖的影响及其机制.方法 构建针对SATB1的shRNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染至U251和SHG44细胞中,分为对照组、空载体转染组、重组质粒转染组,分别通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各组细胞SATB1基因和蛋白的表达
【机 构】
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201900上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科,201900上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科,201900上海交通大学医学院附属第三人民医院神经外科,201900上海交通大学医学院附
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目的 探讨异性核基质结合区结合蛋白-1(SATB1)短发夹核糖核酸(shRNA)对高表达SATB1的人胶质瘤细胞株U251和SHG44增殖的影响及其机制.方法 构建针对SATB1的shRNA重组质粒,采用电穿孔的方法转染至U251和SHG44细胞中,分为对照组、空载体转染组、重组质粒转染组,分别通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测各组细胞SATB1基因和蛋白的表达,以噻唑蓝(MTT)法测各组细胞的增殖活性,Western blot检测各组细胞的蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT、磷酸化叉头转录因子(FoxO1)、细胞周期蛋白(Cyclin D1)、p27蛋白的表达.结果 与对照组(1.22±0.06和1.24 ±0.07)、空载体转染组(1.20±0.05和1.29±0.07)比较,重组质粒转染组(0.24±0.03和0.27±0.02)U251和SHG44细胞SATB1基因的表达下降；与对照组(1.02±0.06和1.03±0.09)、空载体转染组(0.96±0.06和0.98±0.08)比较,重组质粒转染组(0.19±0.02和0.21±0.03) U251和SHG44细胞SATB1蛋白的表达和细胞增殖能力均下降,细胞磷酸化AKT和磷酸化FoxO1水平降低,Cyclin D1蛋白表达减少,p27蛋白表达增多,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 针对SATB1的RNA干扰可以明显抑制转染人胶质瘤细胞株U251和SHG44细胞SATB1的表达和细胞增殖,可能与抑制AKT/FoxO1信号通路,调控下游基因Cyclin D1、p27蛋白的表达有关。
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