【摘 要】
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目的 筛选并克隆转化生长因子β1(TGF-β1)刺激肝星状细胞差异表达下调基因,阐明TGF-β1导致肝纤维化的分子生物学机制.方法 以TGF-β1及磷酸盐缓冲液分别刺激大鼠肝星状细胞
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院感染科,首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所,新疆医科大学基础医学院,中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所
【出 处】
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中华实验和临床感染病杂志（电子版）
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目的 筛选并克隆转化生长因子β1(TGF-β1)刺激肝星状细胞差异表达下调基因,阐明TGF-β1导致肝纤维化的分子生物学机制.方法 以TGF-β1及磷酸盐缓冲液分别刺激大鼠肝星状细胞(即实验组和对照组),提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将对照组细胞cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与实验组细胞cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性PCR扩增,将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠埃希菌进行文库扩增,随机挑选克隆经PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果 成功构建了TGF-β1刺激肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到98个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1000 bp插入片段.选取含有插入片段的35个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得了19种已知基因序列和2个未知功能基因.结论 应用抑制性消减杂交技术成功构建了TGF-β1刺激的肝星状细胞差异表达基因的cDNA消减文库,为进一步阐明TGF-β1参与肝纤维化的分子生物学机制提供了理论依据.
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