大蒜根尖的细胞分裂装片的制作技巧

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  【摘要】装片制作能提高学生的探索兴趣和认识世界的能力,本文就大蒜根尖的培养、取材时机和固定保存、解离与漂洗、染色、压片等的一些技巧做了些经验上的总结,希望能给大家提供参考。
  【关键词】培养温度;取材时机;分裂相;解离;染色
  一、制作大蒜根尖细胞分裂装片的意义
  1.实验在科学教学中的重要作用
  实验是科学教学的重要手段,广泛应用于物理、化学、生物等学科教学中。它在激发学生探索兴趣、培养学生创新意识、创新精神等方面有重要作用,是科学研究启蒙教育的重要途径。要开展实验,教师必须提高自身的实验能力,在教学活动中通过对学生的实验指导,培养学生的探究兴趣,逐步形成创新意识和创新能力。因此,教师应该具备一些基本的实验技能。
  2.装片制作能提高学生的探索兴趣和认识世界的能力
  初中科学教科书中,要求学生会做简单的装片。如:口腔上皮细胞装片、洋葱表皮细胞装片等。对于有爱好的同学,我们可以给以专门的指导。细胞分裂装片的制作是老师需要掌握的,我们可以把这个实验教给兴趣小组,提高他们的学习兴趣和专业技能。
  二、制作过程
  由于大蒜根尖分生区细胞分裂活跃,所以把大蒜根尖作为材料来观察细胞分裂,对我们学习和认识细胞分裂很有帮助。现在我把大蒜根尖细胞分裂装片的制作的经验及基本过程介绍如下
  (一)大蒜根尖的培养
  1.实验材料:大蒜比洋葱实验效果更好
  选用洋葱和大蒜作为试验材料,在18 ℃左右的恒温箱中培养,发现洋葱非常容易坏,且生根量极少。大蒜几乎不坏,且一个蒜瓣的生根量就相当于一个洋葱的生根量,因大蒜的蒜瓣之间有空隙,不易缺氧,避免因缺氧造成的腐烂现象。另外大蒜的染色体数为16,在观察染色体时候也比较方便。
  2.培养温度:2 ℃左右效果最好
  对大蒜的根尖分别作-2 ℃、0 ℃、2 ℃、4 ℃、6℃、8℃的24h 低温根尖培养。在低温处理中,- 2 ℃或0 ℃处理后,镜检时发现几乎无细胞分裂现象, 2 ℃时,只有少数细胞处于分裂期,且分裂时期不明显,4 ℃时,不仅积累了很多前、中、后、末期的细胞,而且染色体比较粗短,典型的分裂相大增,在分生区内,平均每个视野中少则能观察到3~4 个分裂相,多则可见十几个分裂相,6 ℃时分裂期细胞数目减少,8℃时分裂期细胞数目比6 ℃时更少。
  3.培养时间:根尖长到0.5-1cm后取材较好
  用大蒜作为实验材料,等根尖长到0.5-1cm后就可剪取0.3cm进行实验,这样就能大大缩短培养时间,并且实验效果也好,因为幼根的根尖细胞分裂更加旺盛,并且显微镜下也容易区分。如果按照一般实验时间,不仅培养时间长,而且根尖的剪取长度也很难把握。
  (二)取材时机和固定保存
  取材时机最好是中午11:00 点~14: 00 点时取材较好
  本实验对材料的要求是最好用分裂相多的材料作为实验材料。通过对早6:00 点~晚22:00 点之间的不同时段做对比实验得出:在23~28 ℃温度下,中午11:00 点~14:00 点时取材最好,观察到的分裂相最多,其它时间段相对较少。
  由于不能保证在必要时根尖正处于分裂相最多的时期,这就需要把处在细胞分裂旺盛期的根尖随时取下来,进行固定处理。具体有以下两种操作方法:
  把剪取的根尖放入卡诺固定液(纯酒精:氯仿:冰醋酸=12:6:2)中固定1h,然后把根尖保存在70%酒精中。
  (三)解离与漂洗
  将固定以后的根转入盛有15%HCl溶液的试管中,再将试管放入盛有60°C-65°C的水溶液中解离约3min。
  解离后的根尖,必须漂洗干净,以便能够着色。而一般的漂洗时间为10min。为缩短时间,可以将解离后的根尖放入盛有清水的小烧杯中,用玻璃棒不断搅拌,使根尖上附着的盐酸加速溶解,约2-3分钟后,再将根尖放入另一盛有清水的水洗杯中,漂洗一下即可。
  (四)染色
  在实验中发现质量浓度为0. 01g/ mL 的龙胆紫染液易把根尖都染成深紫色,较难观察清楚有丝分裂各时期和染色体行为变化,因此我们将质量浓度为0. 01g/ mL的龙胆紫染液进行稀释。因为醋酸能加强细胞核染色体的选择着色,所以我们选择用冰醋酸进行稀释,通过对几种不同浓度的稀释液(50%冰醋酸、20%、10 %冰醋酸、4 %冰醋酸)进行不同浓度的稀释比较,最后得出:用10 %的冰醋酸以3 :1的比例稀释后染色效果最好。
  (五)压片
  为了减少细胞重叠,保证压片的质量,对于较粗的根尖不宜直接压片,最好是把较粗的根尖纵切成2~3 片再压片。可以用双面刀片在萝卜上割一个根尖长短相当的缝隙,然后用镊子把根尖放入其中,再用左手压紧,右手用刀片把根尖纵切成2~3 片,经纵切后的根尖压片效果非常理想。不但易于观察,同时也能缩短时间,提高实验效率。(如果在解离之前纵切还能进一步缩短解离、漂洗、染色、再漂洗的时间,从而进一步提高实验效率)。
  取染好的洋葱根尖,放在载玻片上,滴一滴清水盖上盖玻片,用吸水纸包上整个装片用拇指轻压,使根尖细胞分散充分。这样不但能将压片过程中渗出来的水吸去,而且更加不容易使根尖和盖玻片移动。
  三、总结
  装片制作的技巧在实际的反复操作中可以不断的改进,但是我们的目的并不在于此,而在于掌握一种认识世界的方法。所以我觉得装片做好后,我们的探索才刚刚开始。
   (作者单位:浙江乐清市芙蓉镇中学)
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