【摘 要】
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目的 观察敲低足细胞CD2相关蛋白(CD2AP)表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响,并探讨其机制.方法 用RPMI 1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系,转染针对CD2AP的小分子干
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院肾内科,武汉,430022
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目的 观察敲低足细胞CD2相关蛋白(CD2AP)表达对细胞黏附和胞质伸展功能的影响,并探讨其机制.方法 用RPMI 1640培养基33℃下培养小鼠未分化足细胞系,转染针对CD2AP的小分子干扰RNA(siRNA),设无特异靶位点的scrambing序列即controlsiRNA转染组作对照.48 h后将转染的足细胞制备成单细胞悬液,接种于预铺有Ⅳ型胶原蛋白的96孔板内,33℃下培养90 min后检测足细胞的贴壁率和细胞的伸展面积;流式细胞仪检测抑制CD2AP后足细胞的凋亡率以及在不同氨基核苷嘌呤霉素(PAN)刺激下足细胞的凋亡率;激光共聚焦显微镜下检测F肌动蛋白(F-actin)的分布变化;Westem印迹和免疫共沉淀检测nephrin蛋白的表达及其磷酸化水平.结果 转染CD2AP siRNA足细胞的黏附率为41.72%±6.07%,显著低于对照组64.46%±8.53%(P200 μm2的比例(55.86%)亦显著低于对照组(73.61%).转染CD2AP siRNA后48 h足细胞的凋亡率高于对照组[(5.73±0.61)%比(3.26±0.45)%,P
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