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[摘 要]目的 研究绞股蓝总皂苷的提取工艺。方法 采用正交试验设计法，以绞股蓝总皂苷提取量为考察指标，对影响绞股蓝总皂苷提取工艺的因素进行了优选。结果 提取时间、提取次数对提取效果有显著影响，乙醇用量的影响不显著。结论 绞股蓝总皂苷的最佳提取工艺为：药材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2h。
[关键词]绞股蓝总皂苷 提取工艺
中图分类号：TD823.9 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0076-01
绞股蓝（Gynostemma）为葫芦科绞股蓝属多年生蔓生草本植物，主要含有皂苷、黄酮、多糖，还含有人体必须的多种氨基酸、维生素和微量元素等成分。现代药理学研究表明，绞股蓝具有抑制肿瘤、抗衰老、降低血脂、增强免疫力和保护心脏的作用。绞股蓝总皂苷片作为药品已经上市多年，用于高脂血症，见有心悸气短、胸闷肢麻、眩晕头痛、健忘耳鸣、自汗乏力或脘腹胀满等心脾气虚、痰阻血瘀者。为了最大限度提取并保持绞股蓝的有效成分，保证绞股蓝药材资源的充分利用，提高经济效益，本研究用正交试验优选绞股蓝提取工艺。
一、仪器与试药
UV-2601型紫外分光光度计（岛津）；人参皂苷Rb1对照品（中国药品生物制品检定所）。冰醋酸、高氯酸、甲醇、香草醛、正丁醇、石油醚等均为分析纯。样品：七叶绞股蓝茎叶混合物，产于四川卧龙地区。
二、方法
1、标准曲线的制备
精密称取人参皂苷Rb1对照品10 mg置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为2.0 mg/mL的储备液。精密量取储备液50、100、150、200、250μL分别置15 mL具塞试管中，挥干甲醇，分别加入新配置的5%香草醛冰醋酸溶液0.4 mL、高氯酸1.6 mL，摇匀，密塞，置60 ℃水浴中加热15 min后取出，立即用冷水冷却至室温，分别精密加入冰醋酸10 mL，摇匀，作为供试品溶液。另精密量取甲醇溶液250 μL置15 mL具塞试管中，按照上述操作，到加入冰醋酸10 mL摇匀为止，作为空白溶液。取供试品溶液和空白溶液，照分光光度法[《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅦA]试验，在560 nm的波长处分别测定吸收度。以人参皂苷Rb1的量X（mg）对吸收度A进行回归，得标准曲线方程为：A=1.275 7X+0.001 9，r=0.998 9。结果表明，当取样量在0.102～0.510 mg范围内时，人参皂苷Rb1的含量与吸收度呈良好的线性关系。
2、绞股蓝总皂苷含量测定方法
精密称取绞股蓝总皂苷粉末20 mg置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取200 μL置15 mL具塞试管中，挥干甲醇后按“2.1”项下操作，测定吸收度，用标准曲线计算出绞股蓝总皂苷的含量。
3、绞股蓝总皂苷的提取工艺
将干燥的绞股蓝药材粉碎成粗粉，准确称量100 g置圆底烧瓶中，用70%乙醇多次回流提取，合并提取液，用旋转蒸发器浓缩后减压干燥，干燥物用1 000 mL的热水充分溶解，加入同体积的石油醚萃取3次，将水层溶液用同体积的水饱和的正丁醇反复萃取，至正丁醇层无色为止，合并正丁醇提取液，用旋转蒸发器浓缩后减压干燥，即得。
4、绞股蓝总皂苷提取工艺的正交设计
根据初步试验结果，選用L9（34）正交试验表，以乙醇用量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）为试验因素，每个因素取3个水平。取样品，按照正交设计进行实验，以绞股蓝总皂苷的提取量为考察指标，进行提取工艺的优选。
5、绞股蓝总皂苷提取工艺的稳定性试验
按照正交试验选择的工艺条件，重复进行绞股蓝总皂苷的提取，并依法测定绞股蓝总皂苷的含量，评价正交试验选择的工艺条件是否稳定。
三、结果
1、正交试验结果
因素水平设计，，极差的直观分析法R值可以看出，因素B的极差0.56为最大，说明它是A、B、C三因素中对绞股蓝总皂苷提取影响最大的因素，其次是因素C，它的极差为0.47，这3个因素对绞股蓝总皂苷提取的影响由大到小的顺序依次为B>C>A。分析结果可以看出，在α=0.1的水平上，B因素和C因素对绞股蓝总皂苷提取有显著性影响，A因素的影响不显著。分析可以得出最佳工艺条件为A1B3C3，即药材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2 h，。？？？
2、绞股蓝总皂苷提取工艺的稳定性试验结果
为了验证正交试验优选的工艺条件的稳定性，称取3份100 g绞股蓝药材，分别按照最佳工艺条件A1B3C3操作。合并回流提取液，用旋转蒸发器浓缩后减压干燥，干燥物用1 000 mL的热水充分溶解，加入同体积的石油醚萃取3次，将水层溶液用同体积水饱和的正丁醇反复萃取，至正丁醇层无色为止，合并正丁醇提取液，用旋转蒸发器减压干燥浓缩。平行操作，依法测定绞股蓝总皂苷的含量。
四、讨论
本实验以绞股蓝总皂苷提取量为参考指标，对绞股蓝总皂苷的提取工艺进行了优选，优选的最佳工艺条件为A1B3C3。按照最佳工艺条件进行重复性试验，试验结果为：绞股蓝总皂苷的平均提取率为（61.3±0.10）g/kg，RSD=1.64%。结果表明，用该工艺提取有较高的绞股蓝总皂苷提取率，且稳定性良好。因甲醇毒性较大，本实验使用乙醇作为提取介质，有利于减少提取液中的杂质，增加溶出度；采用水浴恒温减压提取，可有效克服高温使绞股蓝总皂苷变性的问题。
参考文献
[1] 董玉睿，绞股蓝总皂苷提取工艺研究，论文网，2011，08
[2] 潘峰，刘迪，黄翠霞.绞股蓝总皂苷的药理与临床研究[J].现代中西医结合杂志，2006，15（5）：674-675.
[3] 蒋伟哲，周燕文，李锦桀.广西6种绞股蓝中总皂苷的含量比较[J].药物鉴定，2006，15（3）：26-27.
[关键词]绞股蓝总皂苷 提取工艺
中图分类号：TD823.9 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）10-0076-01
绞股蓝（Gynostemma）为葫芦科绞股蓝属多年生蔓生草本植物，主要含有皂苷、黄酮、多糖，还含有人体必须的多种氨基酸、维生素和微量元素等成分。现代药理学研究表明，绞股蓝具有抑制肿瘤、抗衰老、降低血脂、增强免疫力和保护心脏的作用。绞股蓝总皂苷片作为药品已经上市多年，用于高脂血症，见有心悸气短、胸闷肢麻、眩晕头痛、健忘耳鸣、自汗乏力或脘腹胀满等心脾气虚、痰阻血瘀者。为了最大限度提取并保持绞股蓝的有效成分，保证绞股蓝药材资源的充分利用，提高经济效益，本研究用正交试验优选绞股蓝提取工艺。
一、仪器与试药
UV-2601型紫外分光光度计（岛津）；人参皂苷Rb1对照品（中国药品生物制品检定所）。冰醋酸、高氯酸、甲醇、香草醛、正丁醇、石油醚等均为分析纯。样品：七叶绞股蓝茎叶混合物，产于四川卧龙地区。
二、方法
1、标准曲线的制备
精密称取人参皂苷Rb1对照品10 mg置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为2.0 mg/mL的储备液。精密量取储备液50、100、150、200、250μL分别置15 mL具塞试管中，挥干甲醇，分别加入新配置的5%香草醛冰醋酸溶液0.4 mL、高氯酸1.6 mL，摇匀，密塞，置60 ℃水浴中加热15 min后取出，立即用冷水冷却至室温，分别精密加入冰醋酸10 mL，摇匀，作为供试品溶液。另精密量取甲醇溶液250 μL置15 mL具塞试管中，按照上述操作，到加入冰醋酸10 mL摇匀为止，作为空白溶液。取供试品溶液和空白溶液，照分光光度法[《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅦA]试验，在560 nm的波长处分别测定吸收度。以人参皂苷Rb1的量X（mg）对吸收度A进行回归，得标准曲线方程为：A=1.275 7X+0.001 9，r=0.998 9。结果表明，当取样量在0.102～0.510 mg范围内时，人参皂苷Rb1的含量与吸收度呈良好的线性关系。
2、绞股蓝总皂苷含量测定方法
精密称取绞股蓝总皂苷粉末20 mg置5 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取200 μL置15 mL具塞试管中，挥干甲醇后按“2.1”项下操作，测定吸收度，用标准曲线计算出绞股蓝总皂苷的含量。
3、绞股蓝总皂苷的提取工艺
将干燥的绞股蓝药材粉碎成粗粉，准确称量100 g置圆底烧瓶中，用70%乙醇多次回流提取，合并提取液，用旋转蒸发器浓缩后减压干燥，干燥物用1 000 mL的热水充分溶解，加入同体积的石油醚萃取3次，将水层溶液用同体积的水饱和的正丁醇反复萃取，至正丁醇层无色为止，合并正丁醇提取液，用旋转蒸发器浓缩后减压干燥，即得。
4、绞股蓝总皂苷提取工艺的正交设计
根据初步试验结果，選用L9（34）正交试验表，以乙醇用量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）为试验因素，每个因素取3个水平。取样品，按照正交设计进行实验，以绞股蓝总皂苷的提取量为考察指标，进行提取工艺的优选。
5、绞股蓝总皂苷提取工艺的稳定性试验
按照正交试验选择的工艺条件，重复进行绞股蓝总皂苷的提取，并依法测定绞股蓝总皂苷的含量，评价正交试验选择的工艺条件是否稳定。
三、结果
1、正交试验结果
因素水平设计，，极差的直观分析法R值可以看出，因素B的极差0.56为最大，说明它是A、B、C三因素中对绞股蓝总皂苷提取影响最大的因素，其次是因素C，它的极差为0.47，这3个因素对绞股蓝总皂苷提取的影响由大到小的顺序依次为B>C>A。分析结果可以看出，在α=0.1的水平上，B因素和C因素对绞股蓝总皂苷提取有显著性影响，A因素的影响不显著。分析可以得出最佳工艺条件为A1B3C3，即药材加8倍量70%的乙醇，回流提取3次，每次2 h，。？？？
2、绞股蓝总皂苷提取工艺的稳定性试验结果
为了验证正交试验优选的工艺条件的稳定性，称取3份100 g绞股蓝药材，分别按照最佳工艺条件A1B3C3操作。合并回流提取液，用旋转蒸发器浓缩后减压干燥，干燥物用1 000 mL的热水充分溶解，加入同体积的石油醚萃取3次，将水层溶液用同体积水饱和的正丁醇反复萃取，至正丁醇层无色为止，合并正丁醇提取液，用旋转蒸发器减压干燥浓缩。平行操作，依法测定绞股蓝总皂苷的含量。
四、讨论
本实验以绞股蓝总皂苷提取量为参考指标，对绞股蓝总皂苷的提取工艺进行了优选，优选的最佳工艺条件为A1B3C3。按照最佳工艺条件进行重复性试验，试验结果为：绞股蓝总皂苷的平均提取率为（61.3±0.10）g/kg，RSD=1.64%。结果表明，用该工艺提取有较高的绞股蓝总皂苷提取率，且稳定性良好。因甲醇毒性较大，本实验使用乙醇作为提取介质，有利于减少提取液中的杂质，增加溶出度；采用水浴恒温减压提取，可有效克服高温使绞股蓝总皂苷变性的问题。
参考文献
[1] 董玉睿，绞股蓝总皂苷提取工艺研究，论文网，2011，08
[2] 潘峰，刘迪，黄翠霞.绞股蓝总皂苷的药理与临床研究[J].现代中西医结合杂志，2006，15（5）：674-675.
[3] 蒋伟哲，周燕文，李锦桀.广西6种绞股蓝中总皂苷的含量比较[J].药物鉴定，2006，15（3）：26-27.