研究胰淀素对脂肪变性人L-02肝细胞甘油三酯代谢的影响及其可能机制。
方法以人L-02肝细胞为实验对象，用含50%胎牛血清的高糖改良杜氏伊格尔培养基(DMEM)孵育肝细胞72 h，制备肝细胞脂肪变性模型。实验分为正常肝细胞组(A组)、脂肪变性肝细胞组(B组)、不同浓度胰淀素孵育脂肪变性肝细胞组： 0.01 μmol/L(C组)、0.1 μmol/L(D组)，1 μmol/L(E组)和5 μmol/L(F组)，胰淀素孵育时间为24 h。油红O染色观察每组肝细胞的形态和肝细胞内脂滴情况，甘油三酯定量检测试剂盒检测每组肝细胞内甘油三酯的含量，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测每组肝细胞内脂肪酸合成酶(FAS) mRNA和乙酰辅酶A羧化酶(ACC) mRNA的表达情况。进行正态性和方差齐性检验后，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。
结果用含50%胎牛血清的高糖DMEM培养基孵育肝细胞72 h后，肝细胞胞浆内充满大量红色脂滴，细胞内甘油三酯含量显著升高，说明肝细胞发生脂肪变性。A组甘油三酯含量为(415±52)mg/g蛋白，B组为(1129±96)mg/g蛋白(t＝874, P<0.05)；C、D、E、F组肝细胞内红色脂滴数量减少，甘油三酯含量分别为(898±77)、(740±83)、(515±30)、(628±48)mg/g蛋白(F＝48.0, P<0.05)。RT-PCR结果显示肝细胞脂肪变性后细胞内FAS mRNA和ACC mRNA表达增加，分别是A组的(1.35±0.03)、(1.51±0.04)倍，差异具有统计学意义(t＝47.2、62.9，P<0.05)。不同浓度胰淀素处理后各组肝细胞内FAS mRNA和ACC mRNA表达有不同程度的下降。C、D、E、F组FAS mRNA的表达量分别是B组的(0.89±0.02)、(0.61±0.06)、(0.53±0.04)和(1.27±0.01)倍，与B组相比差异均具有统计学意义(t＝16.2、58.7、70.4、41.2，均P<0.05)。当胰淀素浓度为5 μmol/L时，FAS mRNA表达水平较B组升高。C、D、E、F组ACC mRNA的表达量分别是B组的(0.74±0.02)、(0.66±0.01)、(0.49±0.02)和(1.46±0.05)倍，与B组相比差异均具有统计学意义(t＝30.6、40.6、61.1、57.3，均P<0.05)。当胰淀素浓度为5 μmol/L时，ACC mRNA的表达水平较B组升高。
结论胰淀素孵育脂肪变性肝细胞后肝细胞内甘油三酯含量下降，脂肪变性程度减轻，可能与肝细胞内FAS mRNA和ACC mRNA表达水平变化有关。