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脊椎动物的骨骼形成是一个复杂的过程。从间充质细胞的富集、体节的形成、软骨内成骨或膜内成骨到骨骼的钙化，软骨细胞、成骨细胞和破骨细胞之间总是存在功能的平衡。软骨内成骨作为骨骼形成的一种主要方式，受多种因素的影响，Notch通路在该过程中起到了极其重要的作用。
1 软骨内成骨
脊椎动物的骨骼发育主要有两种形式：一种是以颅面部骨及锁骨为代表的膜内成骨，还有以中轴骨、四肢骨及颅底骨为代表的软骨内成骨[1]。软骨内成骨发生在胚胎早期，始于间充质细胞的富集，继而形成两种不同的细胞亚群：一个群体形成骨骼生长板，即胚胎发育的一次骨化中心，主要决定了骨的形状；另外一群体则形成骨骺端关节软骨，又被称为二次骨化中心，进一步限定了骨的形状和大小[2]。通常，骨的形状不同，骨化的方式也有所不同，如：四肢的长骨为二次骨化形式，而椎骨则为一次骨化形成。颅底软骨的形成及骨化类似于四肢骨，以生长板形式进行。
在间充质细胞富集区，中心区域的细胞终止增殖，进入分化，经过前肥大细胞、肥大细胞、终末肥大细胞最终分化为肥大成熟的软骨细胞，分泌矿化的细胞外基质即形成软骨，为下一步的骨化提供模板。软骨由一层成纤维细胞样细胞包裹，后者被称为软骨膜。当间充质细胞分化到肥大细胞阶段，软骨膜内的细胞开始分化为成骨细胞，同时软骨膜开始转变为血管丰富的骨膜，血管进入软骨基质中，成骨和破骨细胞通过血管分布到软骨基质，开始破坏软骨基质同时分泌骨基质，形成松质骨，存留在骨膜中的成骨细胞则分泌高度钙化的基质形成皮质骨[1]。
2 Notch信号通路
胚胎软骨发育受复杂多变的信号通路综合调节，从现有知识体系来看，主要包括Ihh、BMP、FGF、Wnt、Notch等信号通路[1]。其中，Notch通路通过调节胚胎期干细胞的增殖、分化与凋亡过程，参与调控哺乳动物胚胎体节发生[3]、胚胎神经系统及消化系统的发育[4]，并在肿瘤的发生过程中扮演了重要的角色，现在已成为肿瘤治疗研究的新靶点[5]。近年来，研究者们开始关注该通路在骨发育过程中的作用。Notch基因最初在果蝇体内发现[6]，随后众多的研究证明其广泛存在且高度保守。在哺乳动物，Notch受体包括Notch1-4四种，配体主要有Delta-like1、3、4和Jagged1、2共五种。作为一种跨膜蛋白受体，Notch配体首先在内质网中转录翻译形成初级蛋白并被运输到高尔基体，其中的蛋白转化酶（protein convertases）在Notch1初级蛋白S1位点进行剪切，随后糖基化转移酶（glycosyltransferases）对其进行不同的糖基化修饰，从而影响配体和受体结合后的不同反应[6]。Notch与相邻细胞上的配体结合后，膜旁负性调节区域（juxtamembrane negative control region，NRR）展开，α-secretase识别该区域并在S2位点剪切掉Notch的胞外段，随后γ-secretase在胞内段S3位点的剪切最终产生胞内片段NICD。NICD直接进入细胞核内，与CSL（DNA结合蛋白，不同种属中名称不同）结合，然后募集Maml（NICD的共同激活因子）、结合组蛋白乙酰化酶和核染色质改建复合物等形成复合体，解除CSL对目标基因的转录抑制作用，并最终产生生物学效应[7]。
3 Notch信号通路对软骨内成骨的影响
3.1体内试验：胚胎12.5天（E12.5）的小鼠前肢芽区开始出现成软骨祖细胞的聚集，此时整个干细胞聚集区都呈现Notch1阳性信号，而到16.5天（E16.5），软骨分化成熟时，Notch1阳性细胞只分布于软骨的边缘区域[8]。这提示其可能参与调控软骨内成骨全过程。进一步的模型动物研究表明：Notch过表达（Gain of function）的小鼠总体表现出圆头短吻、胸廓小、躯干及尾部短的特点，阿辛蓝-茜素红染色显示整体软骨发育不全，通过软骨内成骨方式形成的骨普遍体积较小且长度不足，肢端几乎没有骨化中心存在，且这种转基因小鼠均为胚胎期致死[9-10]。也有研究者通过过表达配体激活内源性Notch通路，进一步观察软骨内成骨过程的变化。研究发现，在鸡胚上肢区域用逆转录病毒过表达Del-1后，早期上肢的发育形态并无改变，而在胚胎7天以后，大小上的差异逐渐明显起来，肢端出现畸形。值得注意的是，Notch通路的配体在脊椎动物有五种，其中一种配体的升高并不能全面解释经典Notch通路在软骨发育中的作用[11]。因为不同配体的表达具有阶段性，故以不同配体过表达方式进行研究有利于揭示Notch通路在骨发育不同阶段的影响。这一方面的研究值得进一步深入。同时，因为Notch通路在胚胎的各个系统发育，尤其是神经系统发育中有重要的作用，因此，全身敲除Notch导致胚胎早期致死，无法进行后续研究，而条件性基因敲除策略或许可以避免这一缺点，为后续的骨发育研究创造条件。
3.2体外实验：间充质干细胞、胚胎肢芽微聚体等原代细胞有向软骨细胞分化的潜能，常被用于软骨分化机制的研究。ATDC5细胞系（小鼠畸胎瘤成纤维细胞系）在胰岛素的诱导下发生软骨向分化[12]。ATDC5细胞在诱导早期即开始表达Notch1和相应的配体Del1[8]，这种表达的时间模式与原代细胞的培养结果相似，也类似于体内试验中动物早期干细胞富集区Notch1的表达模式[8]。运用该体外模型，有利于探索Notch信号通路对软骨向分化调控的机制。首先，Notch通路的激活有利于细胞的增殖：在配体Del的激活Notch信号通路的情况下，小鼠间神经嵴细胞克隆的直径明显增大，细胞数目显著增加[13]。其次，在促进细胞增殖的同时，Notch也可调控体外培养细胞的软骨向分化能力。与高表达Del1的D10细胞共培养时，ATDC5细胞软骨结节及细胞外基质形成明显减少[8]；相反，通过DAPT（γ蛋白酶阻断剂）阻断Notch通路后，肢芽微聚体及间充质干细胞中NICD量明显下降，软骨向分化能力增强，表现为软骨结节的表达增多[14-15]；实验从正反两方面说明，Notch信号通路的激活能维持细胞系的增殖潜能，抑制软骨向分化。值得注意的是ATDC5细胞系软骨源性的细胞系，并非多能干细胞。 同样，利用JAG1过表达的质粒使hMSC的Notch通路持续激活，则细胞会维持在聚合体状态，不再继续分化为成熟的圆形肥大细胞[2]。有趣的是，在小鼠神经嵴细胞成软骨诱导初始即刻添加Delta-Fc，软骨结节更丰富，24h后再添加相同剂量Delta-Fc，成软骨情况不会改善[13]。两种相反的实验结果表明了Notch通路作用时间及细胞所处分化阶段的重要性。最新的研究对Notch表达时期的重要性进行了探索，Rachel等利用人间充质干细胞3D聚体培养进行成软骨向诱导，发现Notch通路配体Jag-1及目标基因Hey-1的表达从诱导开始便急剧上升，并在第2天到达最高值，之后迅速下降，在表达下降后，才开始出现软骨分化标志物Col-II的上升。利用DAPT早期阻断Notch通路可有效降低软骨形成，同时若诱导后期Jag-1过表达持续激活Notch通路，则软骨的形成受到抑制。Notch通路的早期激活开启了干细胞的软骨向分化，但在分化后期持续表达却能抑制进一步分化进行，从而维持前体细胞状态[16]。目前，对Notch通路调节细胞凋亡作用的研究主要集中在肿瘤发生发展领域，Notch通路能够抑制肿瘤细胞的凋亡，现已成为肿瘤治疗的新靶点[17]。而 Notch通路对ATDC5凋亡影响的初步研究表明其对凋亡没有明显影响[8]。
综上所述，体内外实验研究表明，Notch能够促进细胞的增殖，启动早期分化，维持前体细胞的干性，抑制细胞的进一步分化成熟，与软骨内成骨过程密切相关。
4 Notch通路与其他通路的相互作用
作为一条高度保守的重要通路，Notch通路调节各个系统的生长发育，只依靠自身有限的受体配体作用，不足以解释其控制发育过程的复杂性，因此通路之间的相互调节共同作用也是十分重要的。在软骨发育中，主要的调节通路包括Sox9、BMP、FGF等可能与Notch通路有交互作用。有研究表明，Jag1通过激活Notch通路抑制Sox9的表达，另一方面，Notch也直接抑制Sox9的目的基因，两条途径共同作用抑制hMSC的软骨向分化[16]。另外，研究发现FGF2能促进小鼠MSC成软骨向分化，阻断Notch通路后，其促进成软骨向分化能力减弱，表现为Col-II表达减少，而利用SU5402阻断FGF通路后，Del-Fc激活Notch通路可部分解除对Col-II的表达抑制，这说明FGF2的部分功能可以通过Notch通路行使[13]。再者，DAPT处理细胞抑制Notch通路后，BMP4表达未受影响，但相应的下游蛋白Id1表达却有了相当的升高，这可能是由于BMP4位于Notch上游并通过其抑制成软骨向分化过程[14]。很多证据表明Notch在影响软骨分化的过程中与其他通路有着密切的联系和相互作用，这是一个复杂而精细的调控网络，具体的机制还有待进一步探讨。
5 结论
软骨内成骨过程中，Notch通路作用的细胞及分子生物学机制是非常复杂的，不同时期配体的调控、与其他通路的相互作用等在Notch行使功能时扮演了重要角色。越来越多的研究表明，Notch通路在控制干细胞的增殖和软骨向分化、维持细胞的干细胞活性、保持基质的平衡方面起了重要的作用，而其中的具体机制仍有待探索。深入研究Notch通路对软骨内成骨的影响有利于人们进一步理解生命发展过程，为各种先天性骨、软骨发育不全等骨畸形的预防性诊断及治疗开辟途径。
[参考文献]
[1]Wuelling M，Vortkamp A.Chondrocyte proliferation and differentiation[J].Endocr Dev，2011， 21：1-11.
[2]Oldershaw RA，Hardingham TE.Notch signaling during chondrogenesis of human bone marrow stem cells[J].Bone，2010，46（2）：286-293.
[3]Shifley ET，Cole SE.The vertebrate segmentation clock and its role in skeletal birth defects[J].Birth Defects Res C Embryo Today，2007，81（2）：121-33.
[4]Guruharsha KG，Kankel MW，Artavanis-Tsakonas S.The Notch signalling system： recent insights into the complexity of a conserved pathway[J].Nat Rev Genet，2012，13（9）：654-666.
[5]Ranganathan P，Weaver KL，Capobianco AJ.Notch signalling in solid tumours： a little bit of everything but not all the time[J].Nat Rev Cancer，2011，11（5）：338-351.
[6]Artavanis-Tsakonas S，Rand MD，Lake RJ.Notch signaling： cell fate control and signal integration in development[J].Science，1999，284（5415）：770-776.
[7]Bray SJ.Notch signalling： a simple pathway becomes complex[J].Nat Rev Mol Cell Biol， 2006，7（9）：678-689.
[8]Watanabe N.Suppression of differentiation and proliferation of early chondrogenic cells by Notch[J].J Bone Miner Metab，2003，21（6）：344-352. [9]Mead TJ，Yutzey KE.Notch pathway regulation of chondrocyte differentiation and proliferation during appendicular and axial skeleton development[J]. Proc Natl Acad Sci US A，2009，106（34）：14420-14425.
[10]Mead TJ，Yutzey KE.Notch pathway regulation of chondrocyte differentiation and proliferation during appendicular and axial skeleton development[J].Proc Natl Acad Sci USA， 2009，106（34）：14420-14425.
[11]Crowe RJ，Niswander L.Delta-1 negatively regulates the transition from prehypertrophic to hypertrophic chondrocytes during cartilage formation[J].Development，1999，126（5）：987-998.
[12]Yao Y，Wang Y.ATDC5： an excellent in vitro model cell line for skeletal development[J].J Cell Biochem，2013，114（6）：1223-1229.
[13]Nakanishi K，Chan YS，Ito K.Notch signaling is required for the chondrogenic specification of mouse mesencephalic neural crest cells[J].Mech Dev，2007，124（3）：190-203.
[14]Fujimaki R.Involvement of Notch signaling in initiation of prechondrogenic condensation and nodule formation in limb bud micromass cultures[J].J Bone Miner Metab，2006，24（3）： 191-198.
[15]Dong Y.RBPjkappa-dependent Notch signaling regulates mesenchymal progenitor cell proliferation and differentiation during skeletal development[J].Development，2010，137（9）： 1461-1471.
[16]Oldershaw RA.Notch signaling through Jagged-1 is necessary to initiate chondrogenesis in human bone marrow stromal cells but must be switched off to complete chondrogenesis[J]. Stem Cells，2008，26（3）：666-674.
[17]Dang TP.Notch， apoptosis and cancer[J].Adv Exp Med Biol，2012，727：199-209.
编辑/李阳利
1 软骨内成骨
脊椎动物的骨骼发育主要有两种形式：一种是以颅面部骨及锁骨为代表的膜内成骨，还有以中轴骨、四肢骨及颅底骨为代表的软骨内成骨[1]。软骨内成骨发生在胚胎早期，始于间充质细胞的富集，继而形成两种不同的细胞亚群：一个群体形成骨骼生长板，即胚胎发育的一次骨化中心，主要决定了骨的形状；另外一群体则形成骨骺端关节软骨，又被称为二次骨化中心，进一步限定了骨的形状和大小[2]。通常，骨的形状不同，骨化的方式也有所不同，如：四肢的长骨为二次骨化形式，而椎骨则为一次骨化形成。颅底软骨的形成及骨化类似于四肢骨，以生长板形式进行。
在间充质细胞富集区，中心区域的细胞终止增殖，进入分化，经过前肥大细胞、肥大细胞、终末肥大细胞最终分化为肥大成熟的软骨细胞，分泌矿化的细胞外基质即形成软骨，为下一步的骨化提供模板。软骨由一层成纤维细胞样细胞包裹，后者被称为软骨膜。当间充质细胞分化到肥大细胞阶段，软骨膜内的细胞开始分化为成骨细胞，同时软骨膜开始转变为血管丰富的骨膜，血管进入软骨基质中，成骨和破骨细胞通过血管分布到软骨基质，开始破坏软骨基质同时分泌骨基质，形成松质骨，存留在骨膜中的成骨细胞则分泌高度钙化的基质形成皮质骨[1]。
2 Notch信号通路
胚胎软骨发育受复杂多变的信号通路综合调节，从现有知识体系来看，主要包括Ihh、BMP、FGF、Wnt、Notch等信号通路[1]。其中，Notch通路通过调节胚胎期干细胞的增殖、分化与凋亡过程，参与调控哺乳动物胚胎体节发生[3]、胚胎神经系统及消化系统的发育[4]，并在肿瘤的发生过程中扮演了重要的角色，现在已成为肿瘤治疗研究的新靶点[5]。近年来，研究者们开始关注该通路在骨发育过程中的作用。Notch基因最初在果蝇体内发现[6]，随后众多的研究证明其广泛存在且高度保守。在哺乳动物，Notch受体包括Notch1-4四种，配体主要有Delta-like1、3、4和Jagged1、2共五种。作为一种跨膜蛋白受体，Notch配体首先在内质网中转录翻译形成初级蛋白并被运输到高尔基体，其中的蛋白转化酶（protein convertases）在Notch1初级蛋白S1位点进行剪切，随后糖基化转移酶（glycosyltransferases）对其进行不同的糖基化修饰，从而影响配体和受体结合后的不同反应[6]。Notch与相邻细胞上的配体结合后，膜旁负性调节区域（juxtamembrane negative control region，NRR）展开，α-secretase识别该区域并在S2位点剪切掉Notch的胞外段，随后γ-secretase在胞内段S3位点的剪切最终产生胞内片段NICD。NICD直接进入细胞核内，与CSL（DNA结合蛋白，不同种属中名称不同）结合，然后募集Maml（NICD的共同激活因子）、结合组蛋白乙酰化酶和核染色质改建复合物等形成复合体，解除CSL对目标基因的转录抑制作用，并最终产生生物学效应[7]。
3 Notch信号通路对软骨内成骨的影响
3.1体内试验：胚胎12.5天（E12.5）的小鼠前肢芽区开始出现成软骨祖细胞的聚集，此时整个干细胞聚集区都呈现Notch1阳性信号，而到16.5天（E16.5），软骨分化成熟时，Notch1阳性细胞只分布于软骨的边缘区域[8]。这提示其可能参与调控软骨内成骨全过程。进一步的模型动物研究表明：Notch过表达（Gain of function）的小鼠总体表现出圆头短吻、胸廓小、躯干及尾部短的特点，阿辛蓝-茜素红染色显示整体软骨发育不全，通过软骨内成骨方式形成的骨普遍体积较小且长度不足，肢端几乎没有骨化中心存在，且这种转基因小鼠均为胚胎期致死[9-10]。也有研究者通过过表达配体激活内源性Notch通路，进一步观察软骨内成骨过程的变化。研究发现，在鸡胚上肢区域用逆转录病毒过表达Del-1后，早期上肢的发育形态并无改变，而在胚胎7天以后，大小上的差异逐渐明显起来，肢端出现畸形。值得注意的是，Notch通路的配体在脊椎动物有五种，其中一种配体的升高并不能全面解释经典Notch通路在软骨发育中的作用[11]。因为不同配体的表达具有阶段性，故以不同配体过表达方式进行研究有利于揭示Notch通路在骨发育不同阶段的影响。这一方面的研究值得进一步深入。同时，因为Notch通路在胚胎的各个系统发育，尤其是神经系统发育中有重要的作用，因此，全身敲除Notch导致胚胎早期致死，无法进行后续研究，而条件性基因敲除策略或许可以避免这一缺点，为后续的骨发育研究创造条件。
3.2体外实验：间充质干细胞、胚胎肢芽微聚体等原代细胞有向软骨细胞分化的潜能，常被用于软骨分化机制的研究。ATDC5细胞系（小鼠畸胎瘤成纤维细胞系）在胰岛素的诱导下发生软骨向分化[12]。ATDC5细胞在诱导早期即开始表达Notch1和相应的配体Del1[8]，这种表达的时间模式与原代细胞的培养结果相似，也类似于体内试验中动物早期干细胞富集区Notch1的表达模式[8]。运用该体外模型，有利于探索Notch信号通路对软骨向分化调控的机制。首先，Notch通路的激活有利于细胞的增殖：在配体Del的激活Notch信号通路的情况下，小鼠间神经嵴细胞克隆的直径明显增大，细胞数目显著增加[13]。其次，在促进细胞增殖的同时，Notch也可调控体外培养细胞的软骨向分化能力。与高表达Del1的D10细胞共培养时，ATDC5细胞软骨结节及细胞外基质形成明显减少[8]；相反，通过DAPT（γ蛋白酶阻断剂）阻断Notch通路后，肢芽微聚体及间充质干细胞中NICD量明显下降，软骨向分化能力增强，表现为软骨结节的表达增多[14-15]；实验从正反两方面说明，Notch信号通路的激活能维持细胞系的增殖潜能，抑制软骨向分化。值得注意的是ATDC5细胞系软骨源性的细胞系，并非多能干细胞。 同样，利用JAG1过表达的质粒使hMSC的Notch通路持续激活，则细胞会维持在聚合体状态，不再继续分化为成熟的圆形肥大细胞[2]。有趣的是，在小鼠神经嵴细胞成软骨诱导初始即刻添加Delta-Fc，软骨结节更丰富，24h后再添加相同剂量Delta-Fc，成软骨情况不会改善[13]。两种相反的实验结果表明了Notch通路作用时间及细胞所处分化阶段的重要性。最新的研究对Notch表达时期的重要性进行了探索，Rachel等利用人间充质干细胞3D聚体培养进行成软骨向诱导，发现Notch通路配体Jag-1及目标基因Hey-1的表达从诱导开始便急剧上升，并在第2天到达最高值，之后迅速下降，在表达下降后，才开始出现软骨分化标志物Col-II的上升。利用DAPT早期阻断Notch通路可有效降低软骨形成，同时若诱导后期Jag-1过表达持续激活Notch通路，则软骨的形成受到抑制。Notch通路的早期激活开启了干细胞的软骨向分化，但在分化后期持续表达却能抑制进一步分化进行，从而维持前体细胞状态[16]。目前，对Notch通路调节细胞凋亡作用的研究主要集中在肿瘤发生发展领域，Notch通路能够抑制肿瘤细胞的凋亡，现已成为肿瘤治疗的新靶点[17]。而 Notch通路对ATDC5凋亡影响的初步研究表明其对凋亡没有明显影响[8]。
综上所述，体内外实验研究表明，Notch能够促进细胞的增殖，启动早期分化，维持前体细胞的干性，抑制细胞的进一步分化成熟，与软骨内成骨过程密切相关。
4 Notch通路与其他通路的相互作用
作为一条高度保守的重要通路，Notch通路调节各个系统的生长发育，只依靠自身有限的受体配体作用，不足以解释其控制发育过程的复杂性，因此通路之间的相互调节共同作用也是十分重要的。在软骨发育中，主要的调节通路包括Sox9、BMP、FGF等可能与Notch通路有交互作用。有研究表明，Jag1通过激活Notch通路抑制Sox9的表达，另一方面，Notch也直接抑制Sox9的目的基因，两条途径共同作用抑制hMSC的软骨向分化[16]。另外，研究发现FGF2能促进小鼠MSC成软骨向分化，阻断Notch通路后，其促进成软骨向分化能力减弱，表现为Col-II表达减少，而利用SU5402阻断FGF通路后，Del-Fc激活Notch通路可部分解除对Col-II的表达抑制，这说明FGF2的部分功能可以通过Notch通路行使[13]。再者，DAPT处理细胞抑制Notch通路后，BMP4表达未受影响，但相应的下游蛋白Id1表达却有了相当的升高，这可能是由于BMP4位于Notch上游并通过其抑制成软骨向分化过程[14]。很多证据表明Notch在影响软骨分化的过程中与其他通路有着密切的联系和相互作用，这是一个复杂而精细的调控网络，具体的机制还有待进一步探讨。
5 结论
软骨内成骨过程中，Notch通路作用的细胞及分子生物学机制是非常复杂的，不同时期配体的调控、与其他通路的相互作用等在Notch行使功能时扮演了重要角色。越来越多的研究表明，Notch通路在控制干细胞的增殖和软骨向分化、维持细胞的干细胞活性、保持基质的平衡方面起了重要的作用，而其中的具体机制仍有待探索。深入研究Notch通路对软骨内成骨的影响有利于人们进一步理解生命发展过程，为各种先天性骨、软骨发育不全等骨畸形的预防性诊断及治疗开辟途径。
[参考文献]
[1]Wuelling M，Vortkamp A.Chondrocyte proliferation and differentiation[J].Endocr Dev，2011， 21：1-11.
[2]Oldershaw RA，Hardingham TE.Notch signaling during chondrogenesis of human bone marrow stem cells[J].Bone，2010，46（2）：286-293.
[3]Shifley ET，Cole SE.The vertebrate segmentation clock and its role in skeletal birth defects[J].Birth Defects Res C Embryo Today，2007，81（2）：121-33.
[4]Guruharsha KG，Kankel MW，Artavanis-Tsakonas S.The Notch signalling system： recent insights into the complexity of a conserved pathway[J].Nat Rev Genet，2012，13（9）：654-666.
[5]Ranganathan P，Weaver KL，Capobianco AJ.Notch signalling in solid tumours： a little bit of everything but not all the time[J].Nat Rev Cancer，2011，11（5）：338-351.
[6]Artavanis-Tsakonas S，Rand MD，Lake RJ.Notch signaling： cell fate control and signal integration in development[J].Science，1999，284（5415）：770-776.
[7]Bray SJ.Notch signalling： a simple pathway becomes complex[J].Nat Rev Mol Cell Biol， 2006，7（9）：678-689.
[8]Watanabe N.Suppression of differentiation and proliferation of early chondrogenic cells by Notch[J].J Bone Miner Metab，2003，21（6）：344-352. [9]Mead TJ，Yutzey KE.Notch pathway regulation of chondrocyte differentiation and proliferation during appendicular and axial skeleton development[J]. Proc Natl Acad Sci US A，2009，106（34）：14420-14425.
[10]Mead TJ，Yutzey KE.Notch pathway regulation of chondrocyte differentiation and proliferation during appendicular and axial skeleton development[J].Proc Natl Acad Sci USA， 2009，106（34）：14420-14425.
[11]Crowe RJ，Niswander L.Delta-1 negatively regulates the transition from prehypertrophic to hypertrophic chondrocytes during cartilage formation[J].Development，1999，126（5）：987-998.
[12]Yao Y，Wang Y.ATDC5： an excellent in vitro model cell line for skeletal development[J].J Cell Biochem，2013，114（6）：1223-1229.
[13]Nakanishi K，Chan YS，Ito K.Notch signaling is required for the chondrogenic specification of mouse mesencephalic neural crest cells[J].Mech Dev，2007，124（3）：190-203.
[14]Fujimaki R.Involvement of Notch signaling in initiation of prechondrogenic condensation and nodule formation in limb bud micromass cultures[J].J Bone Miner Metab，2006，24（3）： 191-198.
[15]Dong Y.RBPjkappa-dependent Notch signaling regulates mesenchymal progenitor cell proliferation and differentiation during skeletal development[J].Development，2010，137（9）： 1461-1471.
[16]Oldershaw RA.Notch signaling through Jagged-1 is necessary to initiate chondrogenesis in human bone marrow stromal cells but must be switched off to complete chondrogenesis[J]. Stem Cells，2008，26（3）：666-674.
[17]Dang TP.Notch， apoptosis and cancer[J].Adv Exp Med Biol，2012，727：199-209.
编辑/李阳利