【摘 要】
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以牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联Oligo（dT）的磁珠纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第1链,以含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART
【机 构】
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吉林大学畜牧兽医学院,中国医学科学院协和医科大学实验动物研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（30571416）
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以牛蛙皮肤组织为材料获得总RNA,用偶联Oligo（dT）的磁珠纯化mRNA后,利用含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物在逆转录酶的作用下合成cDNA的第1链,以含SfiⅠ酶切位点的CDSⅢ引物和SMART引物,利用LD-PCR合成双链cDNA,双链cDNA经SfiⅠ酶切,通过T4DNA连接酶连接到经过相同酶切的λTripIEx2载体,体外包装后转染E.coliXLI-Blue宿主菌,进行滴度测试和文库扩增。结果构建的牛蛙皮肤cDNA文库原始库容量为1.42×10^6PFU/mL,插入片段长度在0.
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