【摘 要】
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为了在大肠杆菌中表达纯化抗人TNF-α单链抗体并检测其结合活性与中和活性.利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人TNF-α单链抗体E6ScFv;分离包含体后进行变性和复性,再用
【机 构】
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安
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为了在大肠杆菌中表达纯化抗人TNF-α单链抗体并检测其结合活性与中和活性.利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人TNF-α单链抗体E6ScFv;分离包含体后进行变性和复性,再用亲和层析法进行纯化;用ELISA法和酵母双杂交系统检测E6ScFv与配体的结合;用L929细胞检测E6ScFv对人TNF-α细胞毒作用的中和活性.经变性,复性与亲和层析,E6ScFv被纯化,在SDS-PAGE上为单一蛋白带;体外结合与中和实验表明,表达纯化的E6ScFv可与人TNF-α结合并中和其细胞毒活性;进一步用酵母双杂交系统证明当表达于细胞内时,E6ScFv仍保持了与TNF-α相结合的能力.
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