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[摘 要] 目的 建立红霉素明胶微球中红霉素含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为DIKMA C18色谱柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为0.1 mol/L磷酸二氫铵(三乙胺调节至pH6.5)乙腈(体积比67∶33),流速1 mL/min;检测波长210 nm。结果 红霉素质量浓度在0.099 2~0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9;平均回收率为100.1%,RSD=0.95%(n=9)。结论 本文方法可用于红霉素明胶微球的含量检测。?
[关键词] 红霉素明胶微球 测定技术
中图分类号:TD823.8 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2014)10-0248-01
红霉素(erythromycin)是临床上应用广泛的抗生素,是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物,但在体内分布广泛,有效治疗浓度维持时间短,容易诱发耐药性,且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应。
红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体,是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球。中国药典(2005年版)中红霉素的含量测定采用微生物检定法,此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等。
本文作者曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量,取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量,并对2种方法进行统计分析,检验2种方法的差异性。
1 仪器与试药
岛津LC10ATVP高效液相色谱仪(SHIMADZU COPRPORATION),紫外SPD10Avp检测器(SHIMADZU COPRPORATION),HW色谱工作站。pHS25pH计(上海精密科学仪器有限公司),超声波清洗器(天津市考德斯科技有限公司)。
红霉素标准品(中国药品生物制品检定所,批号30307200215),乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸水。红霉素明胶微球(简称EMGMS,自制,批号:20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱: DIKMA C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:0.1 mol/L磷酸二氢铵(三乙胺调节pH 6.5)乙腈(体积比67∶33);流速1 mL/min;检测波长:210 nm。
2.2 溶液的配制
精密称取红霉素标准品49.6 mg置50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为0.992 mg/mL的标准品溶液。
精密称取红霉素明胶微球172.3 mg(约相当于红霉素23 mg),充分研磨,显微观察微球完全破坏后,置于容量瓶中加流动相至刻度,超声30 min,放冷,用流动相定容至刻度,摇匀,0.45 μm微孔滤膜过滤,制成供试品溶液。
精密称取空白明胶微球172.4 mg,充分研磨,按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 系统适应性及方法专属性试验
在选定的色谱条件下,分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1 min,理论塔板数按红霉素计算不低于1 000,与其他组分可基线分离,阴性样品不干扰样品测定。
2.4 标准曲线
分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取20 μL进样,记录色谱峰峰面积。以峰面积(A)为横坐标,质量浓度(ρ)为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为:ρ=0.3×10-4A+0.28×10-2,r=0.999 9。结果表明红霉素的质量浓度在0.099 2~0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液在室温放置,分别于0、2、4、6、8、10 h进样,记录色谱峰峰面积,RSD为0.86%,表明样品溶液在10 h内稳定。
2.6 精密度试验
取对照品溶液,于10 h内不同时间重复进样5次,记录色谱峰峰面积,RSD为1.41%,表明精密度良好。
2.7 回收率试验
精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份,加入一定量的红霉素对照品,配制成高、中、低3种质量浓度的溶液,按“2.2”项方法制成供试液,进样测定,计算回收率,结果平均回收率为100.1%,RSD值为0.95%(n=9)。
2.8 重复性试验
取同一批微球(批号:20060809)5份,按“2.2”项方法制成供试液,进样,记录色谱图,计算红霉素含量的RSD为1.2%,表明重复性良好。
2.9 样品的测定
取6批样品,按“2.2”项方法制成供试液,进样测定。并同时按紫外分光光度法进行检测,采用统计软件SAS9.0对2种方法的测定结果进行配对资料两样本均数t检验, 2种方法的测定结果差异无显著性(P=0.85,P>0.05)。
参考文献
[1]伍善广 杨帆 潘育方 黄慧 李桃?,HPLC法测定红霉素明胶微球的含量,2013.05
[2] 陈新谦.新编药物学[M].14版.北京:人民卫生出版社,1997:78-79.
[3] ILLUM L, DAVID S S.Targeting of colloidal particles to the bone marrow[J].Life Sci,1987,40:1553-1560.
[4]伍善广,潘育方,杨帆,等.紫外分光光度法测定红霉素明胶微球的含量[J].海峡药学,2007,19(10):65-66. 3.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版二部[S].北京:化学工业出版社,2005:22
[6]孔小轶,车宝泉,田红昭.高效毛细管电泳法测定红霉素的含量[J].首都都医药,1999,6(7):18.
[7]朱恩东,茅春新.HPLC法测定红霉素含量[J].中国医学研究与临床,2004,16(2):39-40.
[关键词] 红霉素明胶微球 测定技术
中图分类号:TD823.8 文献标识码:A 文章编号:1009-914X(2014)10-0248-01
红霉素(erythromycin)是临床上应用广泛的抗生素,是治疗支原体肺炎、军团菌肺炎的首选药物,但在体内分布广泛,有效治疗浓度维持时间短,容易诱发耐药性,且有口服吸收不规则、肝毒性等不良反应。
红霉素微球是以可生物降解的明胶为载体,是本实验室通过正交试验优化制备的具有合适粒径的肺靶向性微球。中国药典(2005年版)中红霉素的含量测定采用微生物检定法,此法操作繁琐、费时、影响因素多、结果准确性差。文献报道红霉素及其在制剂中含量的检测方法有紫外分光光度法、高效液相法、高效毛细管电泳法等。
本文作者曾采用紫外分光光度法测定红霉素微球的含量,取得良好效果。本文采用高效液相色谱法测定红霉素明胶微球含量,并对2种方法进行统计分析,检验2种方法的差异性。
1 仪器与试药
岛津LC10ATVP高效液相色谱仪(SHIMADZU COPRPORATION),紫外SPD10Avp检测器(SHIMADZU COPRPORATION),HW色谱工作站。pHS25pH计(上海精密科学仪器有限公司),超声波清洗器(天津市考德斯科技有限公司)。
红霉素标准品(中国药品生物制品检定所,批号30307200215),乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸水。红霉素明胶微球(简称EMGMS,自制,批号:20060809、20060812、20060815、20060820、20060822、20060828)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱: DIKMA C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm);流动相:0.1 mol/L磷酸二氢铵(三乙胺调节pH 6.5)乙腈(体积比67∶33);流速1 mL/min;检测波长:210 nm。
2.2 溶液的配制
精密称取红霉素标准品49.6 mg置50 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为0.992 mg/mL的标准品溶液。
精密称取红霉素明胶微球172.3 mg(约相当于红霉素23 mg),充分研磨,显微观察微球完全破坏后,置于容量瓶中加流动相至刻度,超声30 min,放冷,用流动相定容至刻度,摇匀,0.45 μm微孔滤膜过滤,制成供试品溶液。
精密称取空白明胶微球172.4 mg,充分研磨,按“供试品溶液”制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 系统适应性及方法专属性试验
在选定的色谱条件下,分别注入红霉素标准品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液,红霉素拖尾因子为1.26、保留时间约13.1 min,理论塔板数按红霉素计算不低于1 000,与其他组分可基线分离,阴性样品不干扰样品测定。
2.4 标准曲线
分别精密量取标准品溶液1、2、3、4、5 mL置10 mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取20 μL进样,记录色谱峰峰面积。以峰面积(A)为横坐标,质量浓度(ρ)为纵坐标,绘制标准曲线,回归方程为:ρ=0.3×10-4A+0.28×10-2,r=0.999 9。结果表明红霉素的质量浓度在0.099 2~0.496 0 mg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取供试品溶液在室温放置,分别于0、2、4、6、8、10 h进样,记录色谱峰峰面积,RSD为0.86%,表明样品溶液在10 h内稳定。
2.6 精密度试验
取对照品溶液,于10 h内不同时间重复进样5次,记录色谱峰峰面积,RSD为1.41%,表明精密度良好。
2.7 回收率试验
精密吸取已知浓度的红霉素明胶微球溶液9份,加入一定量的红霉素对照品,配制成高、中、低3种质量浓度的溶液,按“2.2”项方法制成供试液,进样测定,计算回收率,结果平均回收率为100.1%,RSD值为0.95%(n=9)。
2.8 重复性试验
取同一批微球(批号:20060809)5份,按“2.2”项方法制成供试液,进样,记录色谱图,计算红霉素含量的RSD为1.2%,表明重复性良好。
2.9 样品的测定
取6批样品,按“2.2”项方法制成供试液,进样测定。并同时按紫外分光光度法进行检测,采用统计软件SAS9.0对2种方法的测定结果进行配对资料两样本均数t检验, 2种方法的测定结果差异无显著性(P=0.85,P>0.05)。
参考文献
[1]伍善广 杨帆 潘育方 黄慧 李桃?,HPLC法测定红霉素明胶微球的含量,2013.05
[2] 陈新谦.新编药物学[M].14版.北京:人民卫生出版社,1997:78-79.
[3] ILLUM L, DAVID S S.Targeting of colloidal particles to the bone marrow[J].Life Sci,1987,40:1553-1560.
[4]伍善广,潘育方,杨帆,等.紫外分光光度法测定红霉素明胶微球的含量[J].海峡药学,2007,19(10):65-66. 3.
[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005年版二部[S].北京:化学工业出版社,2005:22
[6]孔小轶,车宝泉,田红昭.高效毛细管电泳法测定红霉素的含量[J].首都都医药,1999,6(7):18.
[7]朱恩东,茅春新.HPLC法测定红霉素含量[J].中国医学研究与临床,2004,16(2):39-40.