【摘 要】
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磷酸丙糖异构酶（Triosephosphate isomerase，Tpi）和丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）是滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae， MS）进行糖酵解的关键酶，牛支原体（Mycoplasma bovis）和鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum）的Tpi（tpiA基因编码）和PK（pyk基因编码）位于细胞膜和细胞质上，参与对
【基金项目】
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上海科委实验动物专项（18140900700）；
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磷酸丙糖异构酶（Triosephosphate isomerase，Tpi）和丙酮酸激酶（Pyruvate kinase，PK）是滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae， MS）进行糖酵解的关键酶，牛支原体（Mycoplasma bovis）和鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum）的Tpi（tpiA基因编码）和PK（pyk基因编码）位于细胞膜和细胞质上，参与对宿主细胞的粘附，而MS的tpiA和pyk分别编码Tpi和Pyk，目前尚未见相关研究。本研究首先对临床分离的MS分离株的生长特性进行研究，然后使用Overlap PCR对tpiA和pyk进行点突变扩增，分别将其克隆至pET-28a载体并在BL21（DE3）中表达，用获得的TpiA和Pyk蛋白免疫新西兰兔制备多抗。结果表明，分离的MS分离株（MS-SD2020） 最高生长滴定为109，在生长60 h时达到最高滴定；对tpiA和pyk的序列进行分析表明，其在不同MS中高度保守，并成功表达大小分别为35.28和63.36 kDa的TpiA和Pyk重组蛋白，免疫后制备的兔多抗效价分别为32000和2048000，本研究为后续开展MS的TpiA和Pyk功能研究提供参考。
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