【摘 要】
：
目的 分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变,构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析.方法 从服用抗HBV核苷(酸)类似物的患者血清中提取病毒DNA,PCR扩增HBV RT全长基因,克隆到pGEM-Teasy载体中,随机挑选3～5个克隆进行DNA序列测定,以DNASTAR软件分析RT基因内与核苷(酸)类似物耐药相关的常见突变位点.用Xho Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切pGEM-
【机 构】
：
541004,桂林医学院生物技术学院,解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室,解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室,解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室,解放军第三○二医院
论文部分内容阅读
目的 分析40例慢性乙型肝炎患者血清中HBV逆转录酶区基因耐药相关突变,构建突变基因重组表达载体用于表型耐药分析.方法 从服用抗HBV核苷(酸)类似物的患者血清中提取病毒DNA,PCR扩增HBV RT全长基因,克隆到pGEM-Teasy载体中,随机挑选3～5个克隆进行DNA序列测定,以DNASTAR软件分析RT基因内与核苷(酸)类似物耐药相关的常见突变位点.用Xho Ⅰ和Nco Ⅰ双酶切pGEM-Teasy-RT及pTriEx-HBV(C)构建1.1表达载体,测序正确后转染Huh7细胞,检测HBsAg和HBeAg表达水平.结果 40例患者均分别检出拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦耐药相关的单一或联合突变;成功克隆了96条HBV RT基因,分别带有上述核苷(酸)类似物耐药相关变异的序列;挑选主要突变组合形式的40条RT基因构建pTriEx-HBV(C)1.1表达载体,转染Huh7细胞48 h后在培养上清中检测到HBsAg和HBeAg,表明表达载体构建成功.结论 本研究成功进行了临床患者HBV耐药相关突变分析与突变体重组表达载体构建,为进行表型耐药分析打下了基础。
其他文献
目的 对山东省新分离乙脑病毒SD08-10株进行全基因组序列测定和分析,全面了解其基因组特征.方法 设计乙脑病毒全基因组序列扩增引物,RT-PCR扩增片段,PCR产物直接测序,拼接后获得全基因组序列.采用Clestal X(1.8)、DNAStar、GENEDOC(3.2)、Mega(4.0)等生物学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析.结果 新分离乙脑病毒SD08-10株基因组
艾滋病至今仍在全球猖獗,每年新增艾滋病病毒感染者270万.尽管越来越多的患者接受抗病毒治疗,使艾滋病及相关疾病死亡率明显下降,但仍有2500万人死于艾滋病相关疾病[1].增加获得治疗的人数、寻求有效的治疗途径和方案以及提高有效治疗率仍是面临的瓶颈问题。
目的 观察Novalac宝怡乐^TM亲宁^TM止泻配方奶粉治疗小儿轮状病毒肠炎的临床疗效。方法选入无脱水酸中毒的20例轮状病毒肠炎患儿，给予食用Novalac宝怡乐^TM亲宁^TM止泻配方奶粉1周。结果显效率100％。其中48h内粪便恢复正常、全身症状消失17例，占治疗总数的85％（17／20）；72h内大便恢复正常、全身症状消失3例，占治疗总数的15％（3／20）。结论Novalac宝怡乐^TM
目的 评估3种HBV DNA荧光定量PCR检测试剂的临床应用性能.方法 通过平行检测1001例临床血清样本及梯度稀释的阳性样本,从定量线性范围、准确性、灵敏度、特异性等方面,比较分析A试剂(磁珠分离法)、B试剂(免核酸提取的"一步法")与目前国内临床广泛应用的优质试剂C的相关性和差异,并与免疫学结果进行比较.结果 767例均有数值的标本中,三种试剂均值差异无统计学意义.但在低病毒载量组中,结果相差
目的 探讨高危型HPV阳性不孕患者宫颈支原体和衣原体感染与宫颈组织病变的关系.方法 以HPV阴性不孕患者为对照,回顾分析不同高危型别HPV阳性不孕患者宫颈支原体和衣原体感染与宫颈组织病理分级、炎症分级之间的关系.结果 支原体阳性者HPV感染的发生率与支原体阴性者差异有统计学意义(P＜0.01),衣原体阳性者HPV感染的发生率与衣原体阴性者差异无统计学意义(P＞0.05).与HPV阴性组比较,HPV
乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)感染自然史可分为康复、表面抗原(HBsAg)无症状携带者、慢性乙肝、急性乙肝、乙肝后肝硬化、乙肝相关性肝癌等[1].慢性乙肝(chronichepatitis B,CHB)是HBV感染发病的常见状态,CHB的预后主要取决于病毒感染时机和宿主的免疫状况。
目的 研究抗-HBc单项强阳性患者中的隐匿性HBV感染发生率并分析发生原因.方法 收集183例血清学检测抗-HBc单项强阳性(A≤0.1)患者血清标本,采用实时定量PCR进行HBV DNA含量检测.对于DNA定量阳性的标本,PCR扩增HBV pre-S/S区基因,并进行克隆测序.结果 183例血清标本中3例HBV DNA定量结果大于103拷贝/ml,占1.6%.这3例标本中有2例得到pre-S/S
目的 通过HPV 16 E5序列进化分析,初步研究中日友好医院妇产科宫颈病变诊治中心无宫颈病变的汉族妇女HPV 16型内变异株类型.方法 用PCR法扩增HPV 16 E5基因片段,并进行比对分析测序.比对后的结果结合临床资料进行分析.结果 本研究第一次利用只有236 bp碱基的E5序列进行HPV 16变异株的进化分析,发现单独使用E5序列进行HPV 16变异株进化分析的准确率很高,并且,本研究第一
目的 为优生优育、提高人口素质,探讨早期预防和治疗TORCH(T.弓形虫;R.风疹病毒;C.巨细胞病毒;H.单纯疱疹病毒;O.其他病毒)孕期感染,并对阳性患者进行了治疗和优生指导.方法 应用酶联免疫法(ELISA)检测全体对象外周血清中病原体特异性抗体IgM.检测由专人负责,严格按说明书操作.试剂由上海玉兰生物技术研究所提供.结果 阳性总人数319例,总感染率:3.28%,TOX-LgM、RV-L
目的 探讨肝炎肝硬化患者降钙素原(PCT)水平与肝功能的关系.方法 用半定量固相免疫测定方法 测定44例肝硬化患者血清PCT水平并检测ALT、AST、TBIL、ALB、CHE、CHOL、PTA等指标,并进行Child-pugh分级.结果 以PCT＞0.5μg/L为阳性阈值,阳性组患者ALT、TBIL明显高于阴性组,CHOL、PTA明显低于阴性组.随着PCT水平的增加,ALT、AST、TBIL水平均