人心肌肌钙蛋白IcDNA的克隆及分泌表达

来源 :药物生物技术 | 被引量 : 0次 | 上传用户：chsmfzh

【摘要】

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克隆人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因全序列，并进行分泌表达。从人心肌组织提取总RNA，经逆转录得到cDNA第一链，以此为模板，PCR扩增目的条带，重新设计上游引物，用相同PCR程序完成点突变；突

【作者】

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吴国球沈子龙汪兴生劳心珍芦慧霞

【机构】

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中国药科大学生物技术中心,东南大学附属中大医院检验科

【出处】

：

药物生物技术

【发表日期】

：

2003年2期

【关键词】

：

心肌肌钙蛋白I CDNA 克隆分泌表达 Human cardiac troponin Cloning Expression

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克隆人心肌肌钙蛋白I(cTnI)基因全序列，并进行分泌表达。从人心肌组织提取总RNA，经逆转录得到cDNA第一链，以此为模板，PCR扩增目的条带，重新设计上游引物，用相同PCR程序完成点突变；突变后PCR产物克隆入Pfd5载体，并用PCR、SpeI+XhoI双酶切、载体测序等方法鉴定；用ITPG诱导cTnI的表达。PCR扩增出630bp左右条带，Pfd5—cTnI融合表达载体用PCR、SpeI+Xho1双酶切均可见630bp左右条带，测序结果与预期序列一致；诱导后培养基及细胞周质均检测到cTnI蛋白免疫原

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