【摘 要】
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目的 探讨小鼠羊水间充质干细胞(AF-MSC)的分离、培养及鉴定.方法 在无菌条件下获取孕鼠子宫,收集羊水后进行过滤和离心,对沉淀细胞团进行培养并传代.观察AF-MSC的形态,分析AF-MSC的增殖特点,采用流式细胞术鉴定AF-MSC的表面标志物,检测AF-MSC的三系分化能力及冷冻复苏后的细胞活力.结果 小鼠AF-MSC呈典型的梭形,融合度>80％时会出现典型的漩涡状结构.小鼠AF-MSC传代培养无明显潜伏期,培养2～3 d进入对数增长期,增长速度最快,之后增殖速度减慢,进入平台期.AF-MSC表达干细
【机 构】
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110001 沈阳,中国医科大学附属第一医院器官移植科暨肝胆外科
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目的 探讨小鼠羊水间充质干细胞(AF-MSC)的分离、培养及鉴定.方法 在无菌条件下获取孕鼠子宫,收集羊水后进行过滤和离心,对沉淀细胞团进行培养并传代.观察AF-MSC的形态,分析AF-MSC的增殖特点,采用流式细胞术鉴定AF-MSC的表面标志物,检测AF-MSC的三系分化能力及冷冻复苏后的细胞活力.结果 小鼠AF-MSC呈典型的梭形,融合度>80％时会出现典型的漩涡状结构.小鼠AF-MSC传代培养无明显潜伏期,培养2～3 d进入对数增长期,增长速度最快,之后增殖速度减慢,进入平台期.AF-MSC表达干细胞抗原(Sca)-1、CD29、CD44,不表达CD34、CD45.小鼠AF-MSC成骨分化后,矿化结晶被茜素红染成深红色的点状;成软骨分化后,分泌的酸性粘多糖被阿利新蓝染成淡蓝色;成脂分化后,胞质脂滴被油红O染成红色.细胞冷冻复苏后存活率>95％,生长状态良好,6 d时增殖能力高于冻存前(P0.05).结论 本实验成功分离了小鼠AF-MSC,过程简便、成本低,且分离的细胞可随传代次数的增加而纯化,冻存不影响其增殖能力.
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