【摘 要】
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目的:配对盒基因6（paired box gene 6,PAX6）主要在胚胎发育中发挥调控作用，其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关，在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用。本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤（natural killer,NK）细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制。方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HC
【基金项目】
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湖南省自然科学基金（2019JJ40398,2020JJ4768）； 长沙市指导性科技计划项目（kzd22002）～～；
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目的:配对盒基因6（paired box gene 6,PAX6）主要在胚胎发育中发挥调控作用，其异常表达与多种肿瘤的发生、发展有关，在不同肿瘤中可发挥促癌或抑癌的作用。本研究旨在观察过表达PAX6对肝癌细胞生长及自然杀伤（natural killer,NK）细胞对肝癌细胞杀伤能力的影响及其分子机制。方法:采用ELISA技术检测68例肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者和10例健康人外周血的PAX6、可溶性主要组织相容性复合体I类样蛋白A（soluble major histocompatibility complex class I-like protein A,sMICA）和可溶性UL16结合蛋白2（soluble UL16 binding protein 2,sULBP2）的表达水平；体外培养肝癌细胞HepG2和LM3及人正常肝细胞LO2，将PAX6过表达质粒（PAX6-OE）和空载体（NC）转入HepG2和LM3细胞中构建稳定细胞株，分别采用real-time PCR、蛋白质印迹法、免疫荧光等方法检测HepG2和LM3细胞中PAX6的表达水平；在HepG2和LM3细胞中过表达PAX6，采用CCK-8法和细胞划痕实验检测细胞生长和迁移能力，ELISA法检测其上清液中sMICA和s ULBP2的分泌水平，蛋白质印迹法检测基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）、去整合素样金属蛋白酶10（disintegrin and metalloproteinase 10,ADAM10）的蛋白质表达水平；采用流式细胞术检测NK细胞对2种肝癌细胞的杀伤能力。结果:与健康人相比较，HCC患者血清中PAX6表达水平显著降低（P=0.002），而sMICA和sULBP2的表达水平显著增高（P=0.004和P＜0.001）。Real-time PCR、蛋白质印迹法结果显示:与正常肝细胞LO2相比，HepG2和LM3细胞PAX6的mRNA和蛋白质表达水平均显著降低（均P＜0.05）。免疫荧光结果亦可见肝癌细胞HepG2和LM3中PAX6的表达均低于正常肝细胞LO2。与NC组比较，PAX6-OE组肝癌细胞HepG2和LM3的增殖及迁移能力下降（均P＜0.05）;PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞中MMP2、MMP9、ADAM10的蛋白质表达水平均显著降低（均P＜0.05），且PAX6-OE组的HepG2和LM3细胞上清液中s MICA和s ULBP2的分泌水平均显著低于NC组（均P＜0.05）。流式细胞术显示:与NC组比较，PAX6-OE组NK细胞对HepG2和LM3细胞的杀伤率显著增高（均P＜0.05）。结论:PAX6在HCC患者血清及肝癌细胞系中表达降低，过表达PAX6可抑制肝癌细胞生长，增强NK细胞对肝癌细胞的杀伤效率，其机制与PAX6抑制金属蛋白酶的表达、降低sMICA和s ULBP2的分泌水平有关。
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