目的建立用于牛源性样本牛副流感病毒3型(BPIV3)实时荧光定量PCR (Q-PCR)快速检测方法。方法选择已发表的BPIV3 HN基因高度保守区域作为靶基因,设计合成引物和探针,建立BPIV3Q-PCR方法。并对方法的线性、特异性、敏感性、重复性、稳定性等进行方法学评价。同时用建立的Q-PCR方法检测105批次牛源性样本。结果建立的BPIV3Q-PCR方法线性范围为1×101拷贝/μl~1×108拷贝/μl;与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛鼻气管炎病毒(BHV-1)、仙台病毒(SV)均无交叉反应;检测敏感度可以达到1.0×10~1拷贝/μl;3个不同浓度梯度标准品3次不同实验平均变异系数均小于5%。应用建立的方法检测105批次牛源性样本,BPIV3核酸阳性率为12.4%。结论建立的BPIV3QPCR检测方法线性关系良好,具有快速、特异、敏感及稳定的特点,可用于牛源性样本BPIV3的快速定量检测。