【摘 要】
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目的:研究沉默SMYD3对人乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭能力的影响及可能作用机制。方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的SMYD3-microRNA真核表达载体,脂质体法稳定转染乳腺癌MCF-7细
【机 构】
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宁波市第一医院重症监护科,宁波市第一医院肿瘤科,
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目的:研究沉默SMYD3对人乳腺癌细胞MCF-7体外侵袭能力的影响及可能作用机制。方法:构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的SMYD3-microRNA真核表达载体,脂质体法稳定转染乳腺癌MCF-7细胞。通过RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后SMYD3 mRNA及蛋白的表达变化;Matrigel侵袭实验检测细胞体外侵袭能力;平板集落形成实验检测细胞转染前后增殖抑制率;RT-PCR检测转染前后细胞WNT10B mRNA表达的变化。结果:经测序证明所构建干扰序列正确插入pcDNA6.2-GW/EmGFPmiR真核表达载体,序列完整。两干扰组SMYD3 mRNA及蛋白表达水平显著受到抑制,P<0.05;阴性对照组SMYD3的表达与空白组相比几乎无变化,P>0.05。Matrigel侵袭实验结果显示,两干扰组穿膜细胞数分别为(7.53±2.00)和(9.13±2.50),与空白组(63.40±6.85)和阴性对照组(66.69±4.63)相比显著减少,P<0.05。平板克隆形成实验显示,两干扰组集落形成率分别为(16.5%)、(18.7%),与空白组(79.4%)相比显著减少,P<0.05;阴性对照组(76.6%)和空白组相比差异无统计学意义,P>0.05。结论:SMYD3的高表达可明显增强乳腺癌MCF-7细胞的侵袭性,引起细胞转移。这可能与其异常激活下游癌基因WNT10B表达、引起细胞上皮间质化有关。
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