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[摘要] 目的 探讨HSVⅡ-DNA检测对生殖器疱疹中Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSVⅡ）阳性检出率的应用价值。 方法 选取本院2010年7月～2012年7月性病门诊收治的生殖器疱疹患者135例为实验标本，分别予以荧光定量聚合酶链反应法（FQ-PCR）检测 HSVⅡ-DNA和血清酶联免疫吸附法（ELISA）检测HSVⅡ抗体，再以病毒培养法评价以上两种方法的检出率。 结果 FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA检测的HSVⅡ阳性检出率为74.1%，ELISA法HSVⅡ抗体检测的HSVⅡ阳性检出率为65.2%，作病毒培养标准检测的HSVⅡ阳性率为80.7%；FQ-PCR法检测HSVⅡ的灵敏度、阳性及阴性预测值、特异性显著高于ELISA法。 结论 FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA检测的HSVⅡ阳性检出率更贴近于金标准值，并且检测上具有特异性强、灵敏度高、快速等优越性，对于临床诊断生殖器疱疹具有重要的应用价值，值得推广应用。
[关键词] 阳性率；生殖器疱疹；病毒培养；单纯疱疹病毒
[中图分类号] R752.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）13-0092-02
生殖器疱疹（简称GH）是临床常见的一种性传播疾病，由感染单纯疱疹病毒（HSV）所引起[1]。HSV又分为Ⅰ型和Ⅱ型，近年来研究发现，GH的主要感染病原体为HSVⅡ，且发病率逐年增加，已成为最主要的生殖器溃疡疾病之一[2]。目前HSVⅡ的实验室检测方法颇多，本文采用FQ-PCR法检测GH患者的HSVⅡ-DNA，并与ELISA法HSVⅡ抗体检测进行对比，探讨该方法对于GH诊断的临床检测意义，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
选择本院2010年7月～2012年7月性病门诊收治的生殖器疱疹患者135例为实验标本，其中男91例，女44例，年龄21～56岁，平均（35.3±7.7）岁，病程3 d～5年。入选标准： ①有非婚不洁性接触史或者是配偶有GH病史；②生殖器、外阴或者是宫颈皮肤或黏膜有红斑、裂隙、丘疹、水疱、糜烂、溃疡、脓包和结痂等，局部刺痛瘙痒；③近两周内未使用过抗病毒药、抗生素以及免疫调节剂。
1.2 方法
1.2.1 标本的采集 采用无菌棉签擦取患者皮损部位的液体或者是阴道分泌物，放入0.5 mL的生理盐水中；另同时采少量标本，立即放入0.5 mL的病毒移送液中，置入-70℃的冰箱中保存备用。同时抽取2 mL的患者静脉血，进行离心取血清备用。
1.2.2 HSVⅡ检测 ①HSVⅡ抗体检测：采用美国Trinity公司生产的HSVⅡ检测ELISA试剂盒，根据试剂盒说明进行具体严格操作。采用酶标仪（美国Hyperion-MR生产）对血清样本进行HSVⅡ抗体检测。②HSVⅡ-DNA检测：采用的试剂盒为深圳匹基生物工程公司生产，在HSV-DNA保守聚合酶基因序列的设计引物上进行FQ-PCR检测，根据试剂盒说明严格予以操作。③病毒培养：取0.1 mL病毒移送液，将其接种到已经成片的Vero细胞上，在37℃温度中吸附2 h后再注入维持液，进行37℃恒温培养，观察细胞的每日病变（CPE），第3天后若无CPE出现，即汲取培养液0.1 mL，将其转种于新制单层Vero细胞上继续进行观察，如此盲传3代，仍然没有出现典型CPE，病毒分离报告即可定为阴性。
1.2.3 评价FQ-PCR和ELISA （1）以病毒培养检测出的结果为金标准，对上述两种方法检测 HSVⅡ的特异度、灵敏度、阳性及阴性预测值分别予以计算，并进行评价。（2）特异性是指HSVⅡ检测在生殖器疱疹患者以外的人群中的百分比或者是真阴性率，抽选非患该病者为对照组，然后与本组实验对象进行“ ”“-”分布频数计算。特异性（%）=真阴性/（假阳性 真阴性）×100%， 灵敏度（%）=真阳性/（假阴性 真阳性）×100%。
1.3 统计学方法
采用SPSS13.0软件，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HSVⅡ阳性检出率
135例患者FQ-PCR法行HSVⅡ-DNA检测检出HSVⅡ阳性100例（74.1%），135例患者中ELISA法HSVⅡ行抗体检测检出HSVⅡ阳性88例（65.2%），135例患者作病毒培养检出HSVⅡ阳性109例（80.7%），FQ-PCR法HSVⅡ阳性检出率明显更贴近于标准值。
2.2 评价HSVⅡ检测效果
FQ-PCR法检测HSVⅡ的灵敏度、阳性及阴性预测值、特异性显著高于ELISA法。
3 讨论
生殖器疱疹（GH）较容易复发，常给患者的性心理障碍及生活质量造成巨大影响，并且HSV感染者大大提高了HIV的易感性。因此，GH患者HSVⅡ的早期检测、及早诊断和治疗对于促进病人皮损愈合、减少其危害性、降低传染性具有重要意义[3]。
目前实验室HSVⅡ检测方法有以下几种：免疫荧光检测（简称IFA）、病毒分离培养、免疫印迹检测（简称WB）、抗体检测（简称 ELISA）及分子生物检测（简称PCR），但以从皮损或水疱组织液内分离培养出HSVⅡ为检测的“金标准”[4]。虽然病毒分离培养是作为GH临床诊断的“金标准”，但因受成本较高、实验条件严格且操作繁琐等因素影响，只作科研用或者是流行病学调查。目前临床诊断中仍以血清抗体检测方式（ ELISA）为主，但当在HSV-Ⅱ感染的初期，患者血清中尚未出现病毒抗体，还有当机体对感染HSV-Ⅱ的免疫反应较低时，并不能产生易检测抗体，其特异性和灵敏度有待提高。FQ-PCR是近几年发展起来的新型检测技术，为分子生物学检测，用PCR实时荧光定量法对患者皮损中的HSV Ⅱ-DNA进行检测，能直接检测出患者皮损部位的HSV-Ⅱ病原体，具有检测速度快、高灵敏度及特异性强的优势，大大提高了GH的确诊能力。同时不需要开盖进行PCR产物检测，避免了传统PCR技术上易发生假阴性或假阳性污染的不足，增强了诊断的特异性和准确性，临床上应用亦越来越广泛[5]。
本文研究显示，135例患者FQ-PCR法行HSVⅡ-DNA检测检出HSVⅡ阳性100例（74.1%），135例患者中ELISA法HSVⅡ行抗体检测检出HSVⅡ阳性88例（65.2%），135例患者作病毒培养检出HSVⅡ阳性109例（80.7%），FQ-PCR法HSVⅡ阳性检出率明显更贴近于标准值，且表1中显示FQ-PCR法检测HSVⅡ的灵敏度、阳性及阴性预测值、特异性显著高于ELISA法，充分论证了FQ-PCR方法检测的优越性。
综上所述，FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA检测的HSVⅡ阳性检出率更贴近于金标准值，并且检测上具有特异性强、灵敏度高、快速等优越性，对于临床诊断生殖器疱疹具有重要的应用价值，值得大力推广应用。
[参考文献]
[1] 付玉梅，张晓坤，杨晓仪. 单纯疱疹病毒抗体检测在生殖器疱疹诊断中的应用[J]. 广东医学，2011，32（22）：2970.
[2] 蒋源，黄述江，韩永智. 伐昔洛韦抑制疗法治疗复发性生殖器疱疹的临床疗效[J]. 实用医学杂志，2012，28（12）：2053.
[3] 方小娴，林贤娜，方苗. 疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒抗原及抗体检测与分析[J]. 国际医药卫生导报，2012，18（17）：2519.
[4] 陈志瑾，黎庶，杨杰，等. 细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究[J]. 医学研究生学报，2008，21（2）：155-158.
[5] 尹兴平，张海平，曹蕾. 荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测生殖器疱疹病毒的对比研究[J]. 中国实验诊断学，2012，16（7）：1261.
（收稿日期：2013-02-25）
[关键词] 阳性率；生殖器疱疹；病毒培养；单纯疱疹病毒
[中图分类号] R752.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）13-0092-02
生殖器疱疹（简称GH）是临床常见的一种性传播疾病，由感染单纯疱疹病毒（HSV）所引起[1]。HSV又分为Ⅰ型和Ⅱ型，近年来研究发现，GH的主要感染病原体为HSVⅡ，且发病率逐年增加，已成为最主要的生殖器溃疡疾病之一[2]。目前HSVⅡ的实验室检测方法颇多，本文采用FQ-PCR法检测GH患者的HSVⅡ-DNA，并与ELISA法HSVⅡ抗体检测进行对比，探讨该方法对于GH诊断的临床检测意义，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
选择本院2010年7月～2012年7月性病门诊收治的生殖器疱疹患者135例为实验标本，其中男91例，女44例，年龄21～56岁，平均（35.3±7.7）岁，病程3 d～5年。入选标准： ①有非婚不洁性接触史或者是配偶有GH病史；②生殖器、外阴或者是宫颈皮肤或黏膜有红斑、裂隙、丘疹、水疱、糜烂、溃疡、脓包和结痂等，局部刺痛瘙痒；③近两周内未使用过抗病毒药、抗生素以及免疫调节剂。
1.2 方法
1.2.1 标本的采集 采用无菌棉签擦取患者皮损部位的液体或者是阴道分泌物，放入0.5 mL的生理盐水中；另同时采少量标本，立即放入0.5 mL的病毒移送液中，置入-70℃的冰箱中保存备用。同时抽取2 mL的患者静脉血，进行离心取血清备用。
1.2.2 HSVⅡ检测 ①HSVⅡ抗体检测：采用美国Trinity公司生产的HSVⅡ检测ELISA试剂盒，根据试剂盒说明进行具体严格操作。采用酶标仪（美国Hyperion-MR生产）对血清样本进行HSVⅡ抗体检测。②HSVⅡ-DNA检测：采用的试剂盒为深圳匹基生物工程公司生产，在HSV-DNA保守聚合酶基因序列的设计引物上进行FQ-PCR检测，根据试剂盒说明严格予以操作。③病毒培养：取0.1 mL病毒移送液，将其接种到已经成片的Vero细胞上，在37℃温度中吸附2 h后再注入维持液，进行37℃恒温培养，观察细胞的每日病变（CPE），第3天后若无CPE出现，即汲取培养液0.1 mL，将其转种于新制单层Vero细胞上继续进行观察，如此盲传3代，仍然没有出现典型CPE，病毒分离报告即可定为阴性。
1.2.3 评价FQ-PCR和ELISA （1）以病毒培养检测出的结果为金标准，对上述两种方法检测 HSVⅡ的特异度、灵敏度、阳性及阴性预测值分别予以计算，并进行评价。（2）特异性是指HSVⅡ检测在生殖器疱疹患者以外的人群中的百分比或者是真阴性率，抽选非患该病者为对照组，然后与本组实验对象进行“ ”“-”分布频数计算。特异性（%）=真阴性/（假阳性 真阴性）×100%， 灵敏度（%）=真阳性/（假阴性 真阳性）×100%。
1.3 统计学方法
采用SPSS13.0软件，计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 HSVⅡ阳性检出率
135例患者FQ-PCR法行HSVⅡ-DNA检测检出HSVⅡ阳性100例（74.1%），135例患者中ELISA法HSVⅡ行抗体检测检出HSVⅡ阳性88例（65.2%），135例患者作病毒培养检出HSVⅡ阳性109例（80.7%），FQ-PCR法HSVⅡ阳性检出率明显更贴近于标准值。
2.2 评价HSVⅡ检测效果
FQ-PCR法检测HSVⅡ的灵敏度、阳性及阴性预测值、特异性显著高于ELISA法。
3 讨论
生殖器疱疹（GH）较容易复发，常给患者的性心理障碍及生活质量造成巨大影响，并且HSV感染者大大提高了HIV的易感性。因此，GH患者HSVⅡ的早期检测、及早诊断和治疗对于促进病人皮损愈合、减少其危害性、降低传染性具有重要意义[3]。
目前实验室HSVⅡ检测方法有以下几种：免疫荧光检测（简称IFA）、病毒分离培养、免疫印迹检测（简称WB）、抗体检测（简称 ELISA）及分子生物检测（简称PCR），但以从皮损或水疱组织液内分离培养出HSVⅡ为检测的“金标准”[4]。虽然病毒分离培养是作为GH临床诊断的“金标准”，但因受成本较高、实验条件严格且操作繁琐等因素影响，只作科研用或者是流行病学调查。目前临床诊断中仍以血清抗体检测方式（ ELISA）为主，但当在HSV-Ⅱ感染的初期，患者血清中尚未出现病毒抗体，还有当机体对感染HSV-Ⅱ的免疫反应较低时，并不能产生易检测抗体，其特异性和灵敏度有待提高。FQ-PCR是近几年发展起来的新型检测技术，为分子生物学检测，用PCR实时荧光定量法对患者皮损中的HSV Ⅱ-DNA进行检测，能直接检测出患者皮损部位的HSV-Ⅱ病原体，具有检测速度快、高灵敏度及特异性强的优势，大大提高了GH的确诊能力。同时不需要开盖进行PCR产物检测，避免了传统PCR技术上易发生假阴性或假阳性污染的不足，增强了诊断的特异性和准确性，临床上应用亦越来越广泛[5]。
本文研究显示，135例患者FQ-PCR法行HSVⅡ-DNA检测检出HSVⅡ阳性100例（74.1%），135例患者中ELISA法HSVⅡ行抗体检测检出HSVⅡ阳性88例（65.2%），135例患者作病毒培养检出HSVⅡ阳性109例（80.7%），FQ-PCR法HSVⅡ阳性检出率明显更贴近于标准值，且表1中显示FQ-PCR法检测HSVⅡ的灵敏度、阳性及阴性预测值、特异性显著高于ELISA法，充分论证了FQ-PCR方法检测的优越性。
综上所述，FQ-PCR 法HSVⅡ-DNA检测的HSVⅡ阳性检出率更贴近于金标准值，并且检测上具有特异性强、灵敏度高、快速等优越性，对于临床诊断生殖器疱疹具有重要的应用价值，值得大力推广应用。
[参考文献]
[1] 付玉梅，张晓坤，杨晓仪. 单纯疱疹病毒抗体检测在生殖器疱疹诊断中的应用[J]. 广东医学，2011，32（22）：2970.
[2] 蒋源，黄述江，韩永智. 伐昔洛韦抑制疗法治疗复发性生殖器疱疹的临床疗效[J]. 实用医学杂志，2012，28（12）：2053.
[3] 方小娴，林贤娜，方苗. 疑似生殖器疱疹患者单纯疱疹病毒抗原及抗体检测与分析[J]. 国际医药卫生导报，2012，18（17）：2519.
[4] 陈志瑾，黎庶，杨杰，等. 细胞培养与PCR法检测生殖器疱疹病毒的对比研究[J]. 医学研究生学报，2008，21（2）：155-158.
[5] 尹兴平，张海平，曹蕾. 荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测生殖器疱疹病毒的对比研究[J]. 中国实验诊断学，2012，16（7）：1261.
（收稿日期：2013-02-25）