【摘 要】
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目的探讨原纤维蛋白1(FBN1)在猪耳软骨细胞工程化软骨组织中的表达情况，以及过表达FBN1后对软骨细胞表型和细胞外基质表达的影响。方法取3只长枫杂交猪单侧耳廓软骨，提取软骨细胞扩增至第2代，以6.0×107/ml的密度(200 μl)接种于直径为10 mm、厚2 mm的聚羟基乙酸-聚乳酸(PGA-PLA)支架材料上，体外培养5周，构建9块细胞材料混合物组织块；将6块细胞材料混合物植入3只裸鼠体内
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院研究中心 100144,中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院研究中心 100144,中国医学科学院北京协和医学院整形外科医院研究中心 100144,中国医学
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目的探讨原纤维蛋白1(FBN1)在猪耳软骨细胞工程化软骨组织中的表达情况，以及过表达FBN1后对软骨细胞表型和细胞外基质表达的影响。
方法取3只长枫杂交猪单侧耳廓软骨，提取软骨细胞扩增至第2代，以6.0×107/ml的密度(200 μl)接种于直径为10 mm、厚2 mm的聚羟基乙酸-聚乳酸(PGA-PLA)支架材料上，体外培养5周，构建9块细胞材料混合物组织块；将6块细胞材料混合物植入3只裸鼠体内，每只2块，培养10周，构建工程化软骨组织6块。HE染色分别检测3块体外培养5周的细胞材料混合物及裸鼠体内培养10周后的组织工程化软骨形态；取3块2 cm×1 cm大小的另一侧猪耳软骨组织及3块1.0 cm×0.5 cm大小的工程化软骨组织提取RNA，通过qPCR检测二者FBN1 mRNA表达差异；取0.5 cm×0.5 cm大小的另一侧猪耳软骨组织及工程化软骨组织各3块，利用免疫组织化学染色检测二者FBN1在蛋白水平的表达及分布差异；在第2代猪耳软骨细胞中转染空载体质粒及FBN1过表达质粒，利用实时荧光定量PCR检测软骨细胞外基质相关基因的表达变化，实验重复3次。所得数据用Graph Pad Prism 6.0进行双尾非配对t检验分析，P<0.05为差异具有统计学意义。
结果HE染色结果显示：体外培养5周时，工程化软骨组织中可见大量软骨细胞及小的软骨陷窝，体内培养10周后，工程化软骨组织中形成明显软骨陷窝；工程化软骨组织FBN1 mRNA的相对表达量(0.001 41±0.000 28)较正常猪耳软骨组织(0.003 58±0.000 34)显著降低，差异有统计学意义(t＝4.913，P＝0.008)；正常组织中FBN1分布于软骨陷窝及软骨膜处，而工程化软骨组织中多分布于软骨膜处，越接近软骨组织中心越少；FBN1过表达组中FBN1 mRNA相对表达量为0.018 03±0.000 64，而空载体对照组为0.006 13±0.001 03，差异具有统计学意义(t＝9.708，P<0.001)；过表达FBN1后软骨细胞SOX9、COL2A1、ACAN等软骨相关基因的相对表达量与对照组相比分别增加了1.273±0.071、1.315±0.104、1.928±0.280倍，差异有统计学意义(t＝3.874、3.311、3.044，P＝0.018、0.001、0.038)。
结论猪耳软骨工程化软骨组织中FBN1 mRNA表达量及蛋白表达量显著低于正常耳软骨组织；体外实验显示FBN1促进软骨细胞COL2A1、ACAN等软骨相关基因的表达。
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