【摘 要】
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目的 建立一种双重实时逆转录PCR,用于G2、G3型轮状病毒的快速检测和定量分析。方法 采用G2、G3型轮状病毒VP7基因特异性引物/探针和体外转录RNAs,建立双重实时逆转录PCR,在
【机 构】
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兰州生物制品研究所有限责任公司第二研究室 甘肃省疫苗工程技术研究中心; 上海生物制品研究所有限责任公司;
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目的 建立一种双重实时逆转录PCR,用于G2、G3型轮状病毒的快速检测和定量分析。方法 采用G2、G3型轮状病毒VP7基因特异性引物/探针和体外转录RNAs,建立双重实时逆转录PCR,在同一反应管中同时检测G2、G3型轮状病毒VP7基因;并对该方法的灵敏度、重复性、有效性进行验证。结果 双重实时逆转录PCR标准曲线R2>0.99,扩增效率在90%～110%之间。灵敏度可达101拷贝,不同浓度体外转录RNAs重复性检测CV均≤4.18%。单重和双重实时逆转录PCR均可以对G2、G3型单价样本和混合样本进行有效检测,试验内CV均≤2.08%,试验间CV均≤2.52%。单重和双重实时逆转录PCR检测同一样本时具有良好的一致性,检测结果之间差异无统计学意义(P>0.05),两种方法相关性较好(R2>0.95)。结论 本方法特异、快速、灵敏且重复性好,实现了同一反应管中同时检测两种目的基因,且缩短了检测周期,降低了检测成本和污染风险,为轮状病毒的分型和定量检测提供了更为快速、有效的检测方法。
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