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目的
在原核系统中高效表达及纯化人II型免疫缺陷病毒(HIV-2)gag蛋白,以期作为检测试剂的原料.
方法采用基因工程手段将编码II型人免疫缺陷病毒(HIV-2)核心蛋白的部分p55 gag1(G1)及全部p55 gag2(G2)基因片段分别克隆到原核高效表达载体 pET28a的T7噬菌体启动子下游,构建出重组表达质粒pET28aG1和 pET28aG2,将其转入不同的受体菌后,IPTG诱导下进行表达.经SDS-PAGE以及免疫印迹分析鉴定表达产物.在变性和非变性条件下,使用Ni-NTA亲和层析对gag蛋白进行了纯化.
结果构建出两个重组表达质粒pET28aG1和 pET28aG2,它们在受体菌BL21(DE3)plysS中有高的表达.pETY28aG1的表达产物相对分子质量为55000,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的10%,pET28aG2的表达产物相对分子质量为61000,表达的重组蛋白约占菌体总蛋白的6.8%,经免疫印迹分析表明,纯化前后的目的蛋白均可与HIV-2患者全血清发生特异性反应.
结论在大肠杆菌中表达及纯化了HIV-2Gag蛋白,具有良好的反应原性,认为可作为HIV-2检测试剂的原料.