【摘 要】
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目的 构建嵌合preS1 21-47位氨基酸(aa)、以全长乙肝病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preS1 aa 37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3,并对比其抗原性.方法 将HBVadr血清型preS1中和表位aa 21-47和aa 37-45分别插入到全长HBc(aa 1-183)和截断HBc (aa 1-144)的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸
【机 构】
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102206北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室,北京出入境检验检疫局保健中心,102206北京,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室,102206北京,中国疾病预防控制中心病毒病预
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目的 构建嵌合preS1 21-47位氨基酸(aa)、以全长乙肝病毒(HBV)核心抗原(HBcAg)为骨架的病毒样颗粒H2和嵌合preS1 aa 37-45、以截断HBcAg为骨架的病毒样颗粒H3,并对比其抗原性.方法 将HBVadr血清型preS1中和表位aa 21-47和aa 37-45分别插入到全长HBc(aa 1-183)和截断HBc (aa 1-144)的第78位天冬氨酸和第79位脯氨酸之间,密码子优化之后全基因合成,目的片段经双酶切(NdeI和XhoI)回收后连接到同样处理的pET43.1a载体上,在大肠埃希菌E.coli BL21(DE3)中表达,精细纯化后通过电镜观察蛋白形态、ELISA以及Western Blott检测其抗原性.结果 成功构建表达质粒H2和H3,并在BL21(DE3)中高效表达和自发组装成病毒样颗粒.纯化后电镜观察H2和H3形态为二十面体立体对称样病毒样颗粒,H2为实心颗粒,直径为(31.61±1.27) nm,H3为空心颗粒,直径为(28.46 ±1.16) nm.统计分析可得H2直径要比H3直径大(P＜0.01).ELISA和Western Blott检测结果证实其插入表位preS1以及载体蛋白HBc的抗原性.结论 成功获得两种嵌合HBV preS1中和表位的病毒样颗粒,为其在疫苗研究中的应用探索奠定基础。
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