质粒型单纯疱疹病毒载体的构建及其在真核细胞中的表达

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gcq1987
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利用基因工程技术构建成功质粒型Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)载体pHSV,其中含有HSV-1包装信号序列和HSV-1复制起点,以及HSV-1 IE68启动子。为验证其构建是否成功,在其IE68启动子下游的多克隆位点上插入了E. coli LacZ基因,构建成pHSVL质粒。用HSV-1温度敏感株(tsK株)超感染传代细胞后,将这种质粒转染入该细胞,pHSVL可在辅助病毒HSV-1 tsK(允许温度为31℃)存在的条件下被包装成病毒颗粒,由此得到的混合病毒含有HSV-1 tsK和pHSVL假病毒颗粒,收获后再感染培养的Vero细胞,原位检测β-半乳糖苷酶活性呈阳性。同时用pHSVL病毒接种体外培养的SD大鼠胚胎脊髓运动神经元,用X-gal原位检测β-半乳糖苷酶的活性,亦发现有阳性的神经元存在。说明载体pHSVL携带的报告基因lacZ在这两种真核细胞中均得以正确表达。报告基因可为其它目的基因所代替,可用于神经生理、病理以及神经系统疾病基因治疗的实验研究。

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