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目的
构建可诱导表达RN181的逆转录病毒载体，探讨其在肝癌细胞中的表达，为进一步研究RN181基因的生物学功能奠定基础。
方法基于基因克隆技术，构建pRetrox-TRE3G/RN181重组载体。常规鉴定后，反应质粒pRetroX-TRE3G/RN181和调控质粒pRetroX-Tet3G分别与Envelope Vector共转染GP2-293细胞包装逆转录病毒。两种病毒共同感染目的细胞SMCC7721，经G418筛选得到稳定细胞株。加强力霉素(Dox)诱导表达RN181，经实时荧光PCR(RT-PCR)、蛋白印迹检测(Western blotting)鉴定后，CCK-8实验和Transwell检测细胞增殖和侵袭情况。
结果重组载体经测序证实构建成功。筛选出的阳性克隆在Dox诱导下，经RT-PCR、Western blotting鉴定证实重组细胞中RN181的mRNA及其蛋白表达水平在诱导与未诱导的细胞系间的差异具有统计学意义(P<0.05)。增殖实验显示Dox诱导后的7721RN181细胞生长减慢。细胞侵袭实验显示RN181上调后细胞侵袭力减弱。
结论我们成功构建的可诱导表达RN181的SMCC7721-RN181重组细胞系为研究RN181的生物学功能提供了有效的细胞模型。研究初步证实了RN181在体外对SMCC7721细胞增殖和侵袭的抑制作用。