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摘 要：在物质鉴定技术体系当中。凝胶色谱法一直以来都是一种非常常用的技术，尤其在头孢菌素药物的高分子杂志测定当中的应用尤其广泛。和其他成分测定技术相比起来，该技术分离效果出色，同时操作简单，易于使用，设备操作也并不复杂，所以在长期实践当中得到了人们的喜爱。本文对于凝胶色谱法测定头孢菌素类药物当中高分子杂质的一些应用要点进行了总结和分析，希望可以给相关工作的开展提供一些参考。
关键词：头孢菌素类药物；凝胶色谱技术；高分子杂质
由于药物药理以及具体的制备工艺的原因，很多抗生素药物当中有很多高分子杂质的存在，其对于抗生素药物效果的正常发挥而言起到了很大的影响，在严重时，甚至会产生一些副作用，所以不难看出高分子杂质测定的重要性，在其投入市场开始大规模销售之前，首先需要保证高分子杂质数量符合于相关规定。现在在头孢菌素类药物的高分子杂质测定当中，凝胶色谱法的应用较为广泛，本文针对其中的测定要点进行了分析。
1 仪器准备和实验准备
对于这种物质分析类的医学实验而言，准备工作是非常重要的，头孢菌素类的药物高分子杂质测定实验也是如此。总结起来，作为实验人员来说，首先需要做好各项准备工作，保证各项参数完全符合说明书的要求，让实验可以取得一个更好的结果。
1.1 仪器准备
对于仪器准备而言，实验人员首先需要将输液设备、检测设备以及数据处理设施准备好，对于输液设备而言，首先需要保证设别在运行过程中输液流动速度的均匀性，让其符合相关标准的规范，同时监测设备准备工作也要着重考虑紫外检测能力，确保该项能力达到饰演的需要。设备准备过程中，工作人员也要及时和色谱工作站的人员取得联络，保证数据记录的准确无误，同时工作人员也可以将数据发送到积分记录仪器当中。仪器准备工作最关键的一个环节就是设置合理的检测标准，及时检测自行配置的仪器设备。实验人员为了可以保证试验的重现性，在工作中也要随时对设备进行复检。
1.2 凝胶色谱柱的准备
在本实验当中凝胶色谱柱起到的作用是非常关键的，工作人员你首先需要足够了解仪器设备，尤其是要明确仪器的最大容量，这样实验人员才能够依据药品的溶解能力来进行实验，以此保证实验成功。一般而言，凝胶色谱柱体积不能超过柱床体积，由于此类药物中存在的高分子杂质比较特殊，尤其是柱床体积更为特别，所以在准备过程中可以直接确定柱床体积在50ml左右，在此基础上就可以确定凝胶色谱柱体积。
1.3 分段玻璃柱管以及提取凝胶介质
对于玻璃柱管而言，首先需要检视其外观，如果出现开口，则应采用玻璃棉和开口橡胶塞来封端，也可以使用可调节玻璃柱管来开展实验。对抗生素药物而言，高分子测定过程中需要采用葡聚糖凝胶来充当试验介质，在实验开始之前也要加水，保证溶胀度，结合实验器材的相关需要来进行测算。其中的浸泡介质如果是蒸馏水，则需要首先将其置于4℃的环境中40小时，或者将水煮沸，将气泡排除到水外，在条件允许时，也可以采用真空脱气的方法来溶胀，这样可以起到更好的实验效果。
1.4 装柱
将溶胀好的凝胶介质用蒸馏水悬浮静置后，每次倾去上层液，以去除凝胶碎屑和杂质。按照这种方法进行多次洗涤，直到上层的精置液澄清为止。实践中可将凝胶介质用水制成悬浆，然后一次性的倒入垂直放置的玻璃柱管中，待凝胶颗粒沉降完毕后即完成装柱。也可在垂直放置的玻璃柱管和漏斗上放开柱管下口，保持液流顺畅，用滴灌逐管从漏斗中加入凝胶悬浆，让凝胶颗粒在蒸馏水中缓慢沉降，注意让漏斗中随时保持一定的凝胶悬浆。
1.5 维护以及恢复凝胶柱
对于凝胶柱而言，维护要点主要在于保证柱床的平衡性和连续性，如果凝胶出现了收缩问题或者气泡变形问题，都需要将凝胶导出，重新进行装柱。如果仅仅柱头部位出现了污损，则可以直接将该部分去除，之后加水，用玻璃棒搅拌，静置之后，凝胶颗粒重新沉降，之后将柱头重新封闭。如果色谱柱出现严重的非特异性吸附问题，那么在后续使用当中就很可能改变凝胶色谱柱分离机制，在严重时，直接由于堵塞从而升高柱压，在这种情况下则需要回复凝胶，进行相关处理。
2 系统适用性实验
系统适用性试验对溶液的制备更加注重方便性和可操作性，系统适用性试验用溶液的配制方法为用主成分对照品与杂质对照品混合配制，但还是会使得有些杂质对照品不能得到，如性质不稳定或分离提取技术要求太高等，但这些杂质峰恰恰又是与主成分峰最难分离的色谱峰。系统适用性试验目前包括很多内容，主要考察对照品测定系统与高分子杂质测定系统中蓝色葡聚糖2000溶液峰的保留时间的比值，以及理论板数和拖尾因子，以此来控制对照品测定与高分子杂质测定时仪器状态的同一性。在以蓝色葡聚糖2000的保留时间来表示高分子杂质的保留特征时，对照品色谱峰及高分子杂质色谱峰与蓝色葡聚糖2000溶液色谱峰保留时间的比值都应控制在一定的限度内，由此才能实现对色谱柱状态的正常控制。
3 操作方法上的注意事项
3.1 样品溶液及对照溶液的制备
具体操作中必须要按规定的标准来配制样品溶液，由于某些高浓度抗生素溶液具有一定的不稳定性，所以通常对样品溶液采取即溶即进的形式。对照溶液的制备上，要注意头孢菌高分子杂质的含量测定，通常以样品自身在SDS水溶液或纯水中的缔合物作为对照进行定量。在制备缔合物时特别要注意对浓度及水的纯度的控制，以此来保证缔合完全。
3.2 进样及进样方式
由于头孢菌素高分子杂质的含量测定，需要对照溶液分别在不同流动相状态下进样，所以更换流动相后凝胶色谱柱应充分平衡后才能进样。进样方式可以采用色谱仪自动进样，也可以选取手动的方式，但是两种进样方式都必须要做到色谱柱端没有死体积，这样才能避免样品的扩散造成峰展宽甚至影响分离。在自动进样操作时可以参照有关液相色谱操作规程进行，手动进样方式主要用于开口柱。
4 结束语
经过前文总结，我们已经知道，在临床当中，头孢菌素是一种较为常用的抗生素，而高分子杂质含量直觉决定其自身的质量，所以需要我们及时对其中的高分子杂质含量进行测定，让其可以发挥预期的药效，避免产生副作用。在长时间贮存的过程当中，头孢菌素类药物会导致各种杂质的产生，以聚合物为主，对于该高分子杂质而言，凝胶色谱法有着很好的分离效果，应用较为广泛，本文针对其使用要点进行简要分析。
参考文献|
[1]董斌，郝爱鱼，彭博，等.用葡聚糖凝胶色谱法测定氟氯西林钠胶囊中的高聚物[J].药学服务与研究，2017，17（5）：398-400.
[2]张斗胜，李進，王琰，等.高效分子排阻色谱法测定注射用盐酸头孢替安高分子杂质[J].医药导报，2017，36（2）：202-204.
[3]石海英，陈修毅，王金虎.分子排阻色谱法测定头孢克肟干混悬剂中高分子杂质的含量[J].中国抗生素杂志，2016，41（2）：122-124.
[4]文凤提，柯圣妹.分子排阻色谱法测定注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠聚合物的改进[J].智慧健康，2017，3（18）.
关键词：头孢菌素类药物；凝胶色谱技术；高分子杂质
由于药物药理以及具体的制备工艺的原因，很多抗生素药物当中有很多高分子杂质的存在，其对于抗生素药物效果的正常发挥而言起到了很大的影响，在严重时，甚至会产生一些副作用，所以不难看出高分子杂质测定的重要性，在其投入市场开始大规模销售之前，首先需要保证高分子杂质数量符合于相关规定。现在在头孢菌素类药物的高分子杂质测定当中，凝胶色谱法的应用较为广泛，本文针对其中的测定要点进行了分析。
1 仪器准备和实验准备
对于这种物质分析类的医学实验而言，准备工作是非常重要的，头孢菌素类的药物高分子杂质测定实验也是如此。总结起来，作为实验人员来说，首先需要做好各项准备工作，保证各项参数完全符合说明书的要求，让实验可以取得一个更好的结果。
1.1 仪器准备
对于仪器准备而言，实验人员首先需要将输液设备、检测设备以及数据处理设施准备好，对于输液设备而言，首先需要保证设别在运行过程中输液流动速度的均匀性，让其符合相关标准的规范，同时监测设备准备工作也要着重考虑紫外检测能力，确保该项能力达到饰演的需要。设备准备过程中，工作人员也要及时和色谱工作站的人员取得联络，保证数据记录的准确无误，同时工作人员也可以将数据发送到积分记录仪器当中。仪器准备工作最关键的一个环节就是设置合理的检测标准，及时检测自行配置的仪器设备。实验人员为了可以保证试验的重现性，在工作中也要随时对设备进行复检。
1.2 凝胶色谱柱的准备
在本实验当中凝胶色谱柱起到的作用是非常关键的，工作人员你首先需要足够了解仪器设备，尤其是要明确仪器的最大容量，这样实验人员才能够依据药品的溶解能力来进行实验，以此保证实验成功。一般而言，凝胶色谱柱体积不能超过柱床体积，由于此类药物中存在的高分子杂质比较特殊，尤其是柱床体积更为特别，所以在准备过程中可以直接确定柱床体积在50ml左右，在此基础上就可以确定凝胶色谱柱体积。
1.3 分段玻璃柱管以及提取凝胶介质
对于玻璃柱管而言，首先需要检视其外观，如果出现开口，则应采用玻璃棉和开口橡胶塞来封端，也可以使用可调节玻璃柱管来开展实验。对抗生素药物而言，高分子测定过程中需要采用葡聚糖凝胶来充当试验介质，在实验开始之前也要加水，保证溶胀度，结合实验器材的相关需要来进行测算。其中的浸泡介质如果是蒸馏水，则需要首先将其置于4℃的环境中40小时，或者将水煮沸，将气泡排除到水外，在条件允许时，也可以采用真空脱气的方法来溶胀，这样可以起到更好的实验效果。
1.4 装柱
将溶胀好的凝胶介质用蒸馏水悬浮静置后，每次倾去上层液，以去除凝胶碎屑和杂质。按照这种方法进行多次洗涤，直到上层的精置液澄清为止。实践中可将凝胶介质用水制成悬浆，然后一次性的倒入垂直放置的玻璃柱管中，待凝胶颗粒沉降完毕后即完成装柱。也可在垂直放置的玻璃柱管和漏斗上放开柱管下口，保持液流顺畅，用滴灌逐管从漏斗中加入凝胶悬浆，让凝胶颗粒在蒸馏水中缓慢沉降，注意让漏斗中随时保持一定的凝胶悬浆。
1.5 维护以及恢复凝胶柱
对于凝胶柱而言，维护要点主要在于保证柱床的平衡性和连续性，如果凝胶出现了收缩问题或者气泡变形问题，都需要将凝胶导出，重新进行装柱。如果仅仅柱头部位出现了污损，则可以直接将该部分去除，之后加水，用玻璃棒搅拌，静置之后，凝胶颗粒重新沉降，之后将柱头重新封闭。如果色谱柱出现严重的非特异性吸附问题，那么在后续使用当中就很可能改变凝胶色谱柱分离机制，在严重时，直接由于堵塞从而升高柱压，在这种情况下则需要回复凝胶，进行相关处理。
2 系统适用性实验
系统适用性试验对溶液的制备更加注重方便性和可操作性，系统适用性试验用溶液的配制方法为用主成分对照品与杂质对照品混合配制，但还是会使得有些杂质对照品不能得到，如性质不稳定或分离提取技术要求太高等，但这些杂质峰恰恰又是与主成分峰最难分离的色谱峰。系统适用性试验目前包括很多内容，主要考察对照品测定系统与高分子杂质测定系统中蓝色葡聚糖2000溶液峰的保留时间的比值，以及理论板数和拖尾因子，以此来控制对照品测定与高分子杂质测定时仪器状态的同一性。在以蓝色葡聚糖2000的保留时间来表示高分子杂质的保留特征时，对照品色谱峰及高分子杂质色谱峰与蓝色葡聚糖2000溶液色谱峰保留时间的比值都应控制在一定的限度内，由此才能实现对色谱柱状态的正常控制。
3 操作方法上的注意事项
3.1 样品溶液及对照溶液的制备
具体操作中必须要按规定的标准来配制样品溶液，由于某些高浓度抗生素溶液具有一定的不稳定性，所以通常对样品溶液采取即溶即进的形式。对照溶液的制备上，要注意头孢菌高分子杂质的含量测定，通常以样品自身在SDS水溶液或纯水中的缔合物作为对照进行定量。在制备缔合物时特别要注意对浓度及水的纯度的控制，以此来保证缔合完全。
3.2 进样及进样方式
由于头孢菌素高分子杂质的含量测定，需要对照溶液分别在不同流动相状态下进样，所以更换流动相后凝胶色谱柱应充分平衡后才能进样。进样方式可以采用色谱仪自动进样，也可以选取手动的方式，但是两种进样方式都必须要做到色谱柱端没有死体积，这样才能避免样品的扩散造成峰展宽甚至影响分离。在自动进样操作时可以参照有关液相色谱操作规程进行，手动进样方式主要用于开口柱。
4 结束语
经过前文总结，我们已经知道，在临床当中，头孢菌素是一种较为常用的抗生素，而高分子杂质含量直觉决定其自身的质量，所以需要我们及时对其中的高分子杂质含量进行测定，让其可以发挥预期的药效，避免产生副作用。在长时间贮存的过程当中，头孢菌素类药物会导致各种杂质的产生，以聚合物为主，对于该高分子杂质而言，凝胶色谱法有着很好的分离效果，应用较为广泛，本文针对其使用要点进行简要分析。
参考文献|
[1]董斌，郝爱鱼，彭博，等.用葡聚糖凝胶色谱法测定氟氯西林钠胶囊中的高聚物[J].药学服务与研究，2017，17（5）：398-400.
[2]张斗胜，李進，王琰，等.高效分子排阻色谱法测定注射用盐酸头孢替安高分子杂质[J].医药导报，2017，36（2）：202-204.
[3]石海英，陈修毅，王金虎.分子排阻色谱法测定头孢克肟干混悬剂中高分子杂质的含量[J].中国抗生素杂志，2016，41（2）：122-124.
[4]文凤提，柯圣妹.分子排阻色谱法测定注射用头孢哌酮钠他唑巴坦钠聚合物的改进[J].智慧健康，2017，3（18）.